NLRP3介导的小胶质细胞焦亡在AT1R拮抗剂抗大鼠神经病理性疼痛中的作用及机制研究

摘要

目的 探讨NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)在血管紧张素1型受体(AT1R)拮抗剂抗大鼠神经病理性疼痛(NP)中的作用及机制。方法 采用坐骨神经慢性压迫损伤法构建NP大鼠模型，将造模成功大鼠随机分为模型(Model)组、 AT1R拮抗剂氯沙坦钾(LP)组、 NLRP3激动剂(nigericin, Nig)组和LP联合Nig组，另设置假手术(Sham)组，每组8只。分别经腹腔注射100 mg/kg LP或1 mg/kg Nig干预大鼠，1次/d,连续5 d。检测术前1 d及术后第7、 12天时各组大鼠机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL); HE染色观察大鼠脊髓组织病理学变化；神经电生理法检测大鼠坐骨神经转导速度(NCV);ELISA检测大鼠脊髓组织中促炎因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18含量；试剂盒检测大鼠脊髓组织中乳酸脱氢酶(LDH)水平；免疫荧光染色观察大鼠脊髓组织中离子化钙结合适配分子1(Iba-1)与消皮素D(GSDMD)蛋白共定位情况；Western blot法检测大鼠脊髓组织中NLRP3、 GSDMD、胱天蛋白酶1(caspase-1)和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)蛋白表达水平。结果 与Sham组比较，Model组大鼠术后7 d、 12 d的MWT和TWL显著降低，NCV降低，IL-1β、 IL-18、 TNF-α和LDH水平显著升高；同时，脊髓组织中Iba-1与GSDMD共定位细胞数量增加，NLRP3、 GSDMD、 caspase-1和ASC蛋白表达水平显著升高。与Model组比较，LP组大鼠术后12 d的MWT和TWL显著升高，NCV升高，IL-1β、 IL-18、 TNF-α和LDH水平显著降低；同时，脊髓组织中Iba-1与GSDMD共定位细胞数量减少，NLRP3、 GSDMD、 caspase-1和ASC蛋白表达水平显著降低。而Nig干预可明显加重NP大鼠的脊髓炎症损伤，并抑制LP对大鼠NP的改善作用。结论 LP可能通过抑制NLRP3介导的小胶质细胞焦亡，进而改善NP大鼠脊髓炎症损伤及疼痛。

关键词

小胶质细胞 / 神经病理性疼痛(NP) / 氯沙坦钾(LP) / 焦亡 / NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3) / 血管紧张素1型受体(AT1R)