黄芩苷体外抗沙眼衣原体活性及其机制研究

摘要

目的 探究黄芩苷体外对沙眼衣原体(CT)活性的抑制作用及对CT感染细胞焦亡的影响。方法 构建CT感染细胞模型，测定不同浓度黄芩苷对CT包涵体形成数量和感染性子代的影响；CCK-8试剂盒测定黄芩苷对HeLa细胞活力的影响，选择对宿主细胞无明显毒性的最佳黄芩苷浓度；通过撤药实验，分析黄芩苷不同作用时间对CT包涵体及感染性子代数量的影响；倒置显微镜观察各组细胞焦亡情况；Western blot法检测黄芩苷对CT感染细胞焦亡相关蛋白水平的影响。结果 黄芩苷对CT的生长呈浓度依赖性抑制。CCK-8细胞毒性测定结果显示，当浓度不高于90μmol/L时黄芩苷处理组的细胞活力超过90%,无明显宿主细胞毒性。随着黄芩苷作用时间的延长，其对CT的抑制效果越明显，说明具有时间依赖性。倒置显微镜观察到CT感染组细胞出现肿胀、气泡状突出的典型焦亡细胞特征，而黄芩苷处理组的细胞气泡状突出现象明显缓解。Western blot结果显示，黄芩苷能明显抑制CT感染细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、前体半胱天冬蛋白酶1(pro-caspase-1)、切割型半胱天冬蛋白酶1(cleaved-caspase-1)、消皮素D-N(GSDMD-N)及焦孔素E(GSDME)蛋白表达水平。结论 黄芩苷能有效抑制体外CT生长，其机制可能与调控NLRP3/caspase-1/GSDMD和GSDME介导的细胞焦亡通路有关。

关键词

沙眼衣原体 / 黄芩苷 / NLRP3/caspase-1/GSDMD / GSDME / 细胞焦亡