低强度超声联合5-氟尿嘧啶对人肝癌HepG2细胞的抑制作用及机制

摘要

目的 探讨5-氟尿嘧啶（5-FU）联合低强度超声（LIUS）对人肝癌HepG2细胞杀伤效应及其作用机制。方法 利用LIUS（频率1.0 MHz,强度0.5 W/cm²,占空比20%）联合5-FU作用于人肝癌HepG2细胞系，采用多功能酶标仪测定细胞内5-FU药物含量，MTT法检测肿瘤细胞活力，Annexin V/PI染色、流式细胞术检测细胞凋亡率，偏振光荧光法检测细胞膜的流动性，Western blot法与免疫荧光染色检测核苷转运蛋白1（ENT-1）及P-糖蛋白（P-gp）的表达水平，免疫荧光染色检测钙网蛋白（CRT）和细胞高迁移率族蛋白B1（HMGB1）的表达。结果 LIUS能够显著增强HepG2细胞内5-FU的积累。与无处理组或单独应用5-FU相比，LIUS联合5-FU可显著降低HepG2细胞的活性，增强细胞早期及总细胞凋亡率；显著增加了HepG2细胞膜的流动性；显著上调介导药物转运进入肿瘤细胞的ENT-1的表达并抑制参与药物外排蛋白P-gp的表达；免疫原性细胞死亡（ICD）标志物CRT外翻，HMGB1从细胞核释放到胞质和胞外。结论 LIUS促进5-FU在肝癌HepG2细胞中的药物累积；5-FU联合LIUS通过正向调控药物细胞内转运蛋白ENT-1和负向调控耐药蛋白P-gp的表达，明显增强5-FU对肝癌细胞HepG2的杀伤效应，并诱导细胞免疫原性死亡。

关键词

免疫原性细胞死亡(ICD) / 肝癌 / 低强度超声 / 5-氟尿嘧啶(5-FU) / 膜流动性 / 膜转运蛋白