基于细胞共培养模型探究单核细胞在汉滩病毒感染致血管内皮细胞损伤中的作用

摘要

目的 探讨单核细胞在汉滩病毒（HTNV）感染致血管内皮细胞功能异常中的作用及调控机制。方法 构建基于Transwell^TM小室的体外共培养模型[中层接种人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）、下层接种HEK293细胞、上层接种外周血单个核细胞（PBMC）或去除单核细胞的PBMC],采用贴壁法去除PBMC中的单核细胞并利用流式细胞术检测去除效果；Western blot法检测组织细胞中HTNV核衣壳蛋白（NP）表达以评估单核细胞对病毒复制水平的影响；进一步利用Bio Plex悬液芯片系统及流式细胞术分别检测共培养模型中细胞因子分泌及T细胞活化水平；采用跨膜电阻（TER）法检测去除单核细胞或添加抗肿瘤坏死因子α（TNF-α）中和抗体后HUVEC通透性；探究单核细胞是否可通过影响免疫微环境稳态进而加重HTNV感染后内皮细胞损伤。结果 去除单核细胞显著促进HEK293细胞及HUVEC中HTNV NP表达；同时，小室上层培养液中TNF-α、白细胞介素1β（IL-1β）、 IL-6等促炎细胞因子水平显著降低，且去除单核细胞的PBMC中细胞毒性T淋巴细胞（CTL）、 1型辅助T （Th1）、 Th2、 Th17细胞活化水平下降；单核细胞去除后HUVEC跨膜电阻值下降趋势减缓，而抗TNF-α中和抗体可逆转单核细胞介导的内皮通透性增加。结论 本研究在方法学上改良Transwell^TM实验，更好的模拟了在体环境中HTNV感染的进程，揭示了单核细胞在HTNV感染致血管内皮细胞损伤中核心的、具有双重性质的调控作用：既可抑制HTNV在组织细胞中的复制，又可通过分泌TNF-α等促炎细胞因子、促进T细胞活化，增加血管内皮通透性；干预TNF-α可显著缓解HTNV感染诱导的内皮细胞损伤。

关键词

外周血单个核细胞(PBMC) / 汉滩病毒 / 单核细胞 / 细胞通透性 / 肿瘤坏死因子α(TNF-α)