基于细胞成像技术的西部马脑炎病毒中和抗体评价方法的建立

摘要

目的 基于细胞成像技术建立一种快速、高通量及可视化的西部马脑炎病毒（WEEV）中和抗体评价方法。方法 首先利用幼仓鼠肾细胞（BHK-21）扩增本课题组前期构建的重组病毒rVSV-WEEV-GFP并进行滴定。然后基于高通量细胞微孔板成像系统（Cytation5）对BHK-21、非洲绿猴肾细胞（Vero）和小鼠神经母细胞瘤细胞（Neuro2a）三种细胞系感染rVSV-WEEV-GFP后进行荧光强度检测，确定rVSV-WEEV-GFP感染效率较好的细胞系；分析rVSV-WEEV-GFP感染细胞在不同时间点、不同感染复数（MOI）、不同细胞密度下平均荧光强度值，以此优化并确定最佳检测条件，从而建立基于细胞成像技术的中和抗体检测方法。进一步利用该方法与传统的空斑减少中和试验（PRNT）对1株广谱中和抗体分别进行50%抑制浓度(IC₅₀)测定，分析两种方法的一致性。最后利用该中和抗体评价方法对实验室前期制备的脑炎甲病毒抗体的中和活性进行评价。结果 Vero细胞为rVSV-WEEV-GFP感染效率较高的细胞系；最佳检测时间和MOI分别是36 h和0.0625;最佳细胞数为每孔1万个细胞；基于细胞成像技术的中和抗体检测方法和PRNT方法具有高度一致性；6株抗体中有3株抗脑炎甲病毒的抗体对于WEEV具有较好的中和活性。结论 本研究建立的基于细胞成像技术的中和抗体评价方法为筛选WEEV高中和活性抗体奠定了良好的基础。

关键词

中和抗体 / 西部马脑炎病毒(WEEV) / 细胞成像技术 / 假病毒