整合素β3过表达细胞系的制备及其对汉滩病毒感染与复制能力的影响

摘要

目的 构建稳定过表达汉滩病毒(HTNV)受体整合素β3(ITGB3)的细胞系，以克服HTNV在常规培养细胞中扩增效率低、滴度不足的问题。方法 通过构建ITGB3的过表达慢病毒载体，利用慢病毒包装系统产生病毒颗粒，感染Vero E6和A549细胞，经嘌呤霉素筛选获得稳定转染的细胞株。采用CCK-8法评估细胞增殖活性，通过实时定量PCR、 Western blot法及免疫荧光技术检测ITGB3的表达水平；接种HTNV后，进一步利用上述方法测定病毒RNA载量、核蛋白(NP)表达水平及病毒滴度变化。结果 ITGB3在Vero E6和A549细胞中实现高效稳定过表达，且对细胞活力无显著影响。HTNV感染后，ITGB3过表达组的病毒RNA复制水平和NP蛋白表达均显著上调，病毒滴度明显高于对照组。结论 成功构建ITGB3稳定过表达细胞系，可有效促进HTNV的复制与扩增，为HTNV的基础研究及抗病毒药物的开发提供了可靠的实验平台。

关键词

汉滩病毒 / A549细胞 / Vero E6细胞 / ITGB3 / 基因过表达