小鼠抗人腺病毒55型纤突蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

摘要

目的 制备针对人腺病毒55型纤突蛋白(HAdV55 Fiber)的鼠源特异性单克隆抗体。方法 采用基因合成技术，成功构建原核表达载体pET28a-HAdV55 Fiber、真核表达载体pCAGGS-HAdV55 Fiber。再将重组质粒pET28a-HAdV55 Fiber转化至感受态BL21(DE3)后，使用AKTA纯化系统对异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达的蛋白进行纯化。采用拔罐法将pCAGGS-HAdV55 Fiber质粒免疫BALB/c小鼠，基础免疫3次，间隔21 d;以纯化Fiber蛋白经腹腔加强免疫2次。末次免疫后3 d,通过将高效价脾细胞与SP2/0细胞进行融合，并采用有限稀释法筛选，成功获得针对Fiber蛋白的单克隆抗体，并对其亚型及腹水效价进行鉴定。采用免疫荧光法检测单克隆抗体对pCAGGS-HAdV55 Fiber转染BHK-21细胞中表达Fiber蛋白的反应性。以课题组前期制备的HAdV55六邻体(Hexon)的单克隆抗体作为捕获抗体，HRP标记上述Fiber抗体为检测抗体筛选能够较好检测出HAdV55的抗体对。结果 成功构建了pET28a-HAdV55 Fiber和pCAGGS-HAdV55 Fiber表达质粒；IPTG成功诱导pET28a-HAdV55 Fiber在BL21(DE3)中表达Fiber蛋白，并获得了纯化的Fiber蛋白；筛选过程中得到了5株杂交瘤细胞株，能稳定分泌抗Fiber蛋白单克隆抗体，其中2A4F3可识别真核细胞表达的Fiber蛋白；确定了以抗Hexon蛋白单克隆抗体2D3为捕获抗体、抗Fiber蛋白单克隆抗体2A4F3为检测抗体的抗体对，可通过双抗体夹心ELISA法检测HAdV55。结论 本研究成功制备了抗HAdV55 Fiber蛋白的特异性抗体，并初步建立了HAdV55的特异性检测方法。

关键词

单克隆抗体 / 人腺病毒55型 / 纤突蛋白(Fiber) / 双抗体夹心ELISA法

基金资助

空军军医大学军事医学珠峰工程人才计划(zfrclyf); 陕西省重点研发计划(2021ZDLSF01-05)