大鼠主动脉血管周围脂肪间充质干细胞的提取扩增及鉴定

摘要

目的 建立大鼠主动脉血管周围脂肪间充质干细胞(PV-ADSC)的提取扩增方法，为血管重塑及相关心血管疾病研究提供可靠的细胞模型。方法 无菌分离1月龄Sprague Dawley(SD)大鼠主动脉血管周围脂肪组织(PVAT),经漂洗、剪碎、消化、过筛后接种培养；待细胞汇合率达80%～90%时进行传代扩增，培养期间持续观察细胞形态及其增殖情况；取P5代细胞，采用流式细胞术分析表面标志物CD分子表达水平，定向诱导分化实验及相应染色检测成脂/成骨/成软骨三系分化潜能。结果原代培养第4天，可见梭形、星形或多角形细胞自接种组织边缘迁出；5～6 d出现岛屿样细胞克隆团；7～8 d细胞集落融合，呈漩涡或平行排列，单层贴壁生长。传代后细胞形态渐趋一致，为典型成纤维样梭形，增殖旺盛，至P8代仍未见明显细胞衰老或异常分化现象。P5代细胞高表达间充质干细胞(MSC)表面标志物CD90(93.60±0.62)%、 CD73(86.80±2.40)%、 CD44(97.77±0.58)%、 CD29(98.60±0.30)%,平均阳性率达(94.19±5.00)%;低表达造血干细胞(HSC)表面标志物CD45(5.42±0.78)%、 CD34(7.15±0.49)%、 CD11b/c(3.74±0.08)%,平均阳性率仅(5.44±1.55)%,显著低于前者。诱导分化实验显示，细胞可成功分化为脂肪细胞(油红O染色阳性)、成骨细胞(茜素红染色阳性)及软骨细胞(阿利新蓝染色阳性)。结论 本研究方法能够成功提取扩增出符合MSC形态学特征及表面标志物表达特点、具备良好自我更新能力和成脂/成骨/成软骨三系分化潜能的大鼠主动脉PV-ADSC,可为血管重塑及相关心血管病研究提供可靠的细胞模型。

关键词

间充质干细胞(MSC) / 血管周围脂肪组织(PVAT) / 形态学观察 / 表面标志物 / 三系分化潜能

基金资助

北京市自然科学基金(7252267); 国家自然科学基金(81072714)