小檗碱通过靶向Lyn抑制BCR通路诱导慢性淋巴细胞白血病B细胞凋亡的机制研究

摘要

目的 探讨小檗碱(BBR)在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中的作用，明确其是否通过直接靶向并抑制Src家族激酶Lck/Yes新型酪氨酸激酶(Lyn),进而诱导白血病细胞凋亡发挥抗肿瘤作用。方法 采用分子对接技术预测BBR与Lyn激酶的结合潜力；通过生物素下拉(Pull-down)实验验证二者的直接相互作用。体外实验使用人慢性B细胞白血病细胞系(MEC-1),通过CCK-8、 TUNEL染色检测细胞活力与凋亡；通过Western blot法检测B细胞受体(BCR)通路关键蛋白Lyn、脾酪氨酸激酶(Syk)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)及凋亡指标B细胞淋巴瘤2基因(Bcl2)相关X蛋白(BAX)、 Bcl2相关细胞死亡激动剂(BAD)、切割型半胱天冬酶3(c-caspase-3)、 Bcl2表达；利用实时定量PCR检测下游基因细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、 Bcl2、骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(c-Myc)转录水平。通过构建Lyn慢病毒过表达稳转株进行功能挽救实验。体内通过尾静脉注射构建C-NKG小鼠白血病模型，采用HE染色评估脾、肝、肺的肿瘤浸润，通过生存分析评估BBR疗效。结果 体外实验显示，BBR浓度依赖性地抑制MEC-1细胞增殖并诱导凋亡，同时抑制BCR通路蛋白磷酸化及下游基因表达。分子对接与Pull-down实验证实BBR可直接结合Lyn。Lyn过表达可逆转BBR诱导的细胞凋亡及对通路的抑制。体内实验表明，BBR治疗能显著减轻白血病小鼠的器官浸润并延长其生存期，此效应可被Lyn过表达抵消。结论 BBR通过直接靶向Lyn激酶，抑制BCR-Lyn-PI3K-AKT信号通路，从而在体内外诱导CLL细胞凋亡、抑制肿瘤进展。本研究为将BBR作为靶向Lyn的天然药物治疗CLL提供了实验依据。

关键词

小檗碱 / Lyn / B细胞受体(BCR) / 慢性淋巴细胞白血病(CLL) / B细胞

基金资助

河南省医学科技攻关计划联合共建项目(LHGJ20250400)