miR-199a-3p靶向PD-L1调控微卫星稳定型结直肠癌免疫逃逸的机制研究

摘要

目的 免疫检查点抑制剂（ICI）对微卫星稳定（MSS）型结直肠癌（CRC）治疗效果有限，本研究旨在阐明MSS CRC免疫逃逸的分子机制。基于课题组前期对程序性死亡受体1（PD-1）单克隆抗体治疗有效与无效的MSS CRC肿瘤组织进行微小RNA （miRNA）谱分析，筛选miR-199a-3p作为候选分子。本研究将在临床样本中进一步验证并开展机制研究。方法 采用实时荧光定量PCR检测相关基因表达水平；通过双荧光素酶报告实验证实miR-199a-3p对程序性死亡配体1（PD-L1）的靶向作用；构建MSS CRC细胞与外周血单个核细胞（PBMC）共培养体系，分析CD8⁺ T细胞比例及细胞因子分泌水平；分别通过CCK-8法、集落形成实验、 Annexin V-FITC/7-AAD染色和划痕实验评估MSS CRC细胞的增殖、凋亡及迁移能力。结果 miR-199a-3p可直接靶向PD-L1并下调其在MSS SW620细胞中的表达，过表达miR-199a-3p后可解除对CD8⁺ T细胞的抑制作用，增强其细胞毒性功能，减轻肿瘤微环境的免疫抑制，并抑制MSS SW620细胞增殖和迁移，促进细胞凋亡，最终削弱MSS SW620细胞免疫逃逸的能力；抑制miR-199a-3p表达则产生相反的作用。结论 miR-199a-3p通过靶向调控PD-L1参与MSS CRC免疫逃逸过程，具有作为潜在无创诊断标志物及治疗靶点的应用价值，为新型免疫治疗策略的优化提供理论依据。

关键词

免疫逃逸 / 微卫星稳定型结直肠癌 / miR-199a-3p / PD-L1

基金资助

黑龙江省普通本科高等学校青年创新人才培养计划项目(UNPYSCT-2020175)