华蟾素通过抑制CD244⁺巨噬细胞恢复T细胞的活性和结直肠癌化疗敏感性

摘要

目的 探讨华蟾素（Cino）对结直肠癌（CRC）肿瘤微环境（TME）以及奥沙利铂（OX）化疗敏感性的影响。方法 挖掘TCGA-COAD队列中CD244的临床表达差异，通过单细胞测序数据的UMAP降维分析明确CD244的细胞定位，同时分析其与免疫细胞的互相作用特征。体内实验建立CRC荷瘤小鼠模型，随机分为4组：Tu组、 Cino组、 OX组和Cino联合OX组，隔日腹腔注射给药处理，分析肿瘤体积、荧光信号/质量变化和组织形态学变化，利用实时定量PCR、 Western blot法和免疫荧光染色等实验技术检测肿瘤增殖、转移情况、 CD244⁺巨噬细胞的表达分布和T细胞活性。体外实验以白细胞介素4（IL-4）刺激RAW264.7细胞构建M2型巨噬细胞模型，观察Cino、 OX或Cino联合OX处理对CD244⁺巨噬细胞表达的影响，并以相应处理的巨噬细胞条件培养基（CM）培养T细胞，检测T细胞耗竭和激活标志物的表达，T细胞杀伤实验检测其杀伤功能。结果 体内实验显示，Cino处理对小鼠肿瘤生长、增殖和转移无明显影响，OX处理和Cino联合OX处理抑制肿瘤的增殖和转移，且Cino联合OX处理抑制作用增强。Cino和OX均抑制肿瘤组织中CD244⁺巨噬细胞的表达，Cino与OX联合有协同抑制作用，Cino、 OX单独处理对T细胞活性无明显影响，二者联合可抑制T细胞耗竭，提高CD8⁺T细胞浸润。体外实验表明，Cino、 OX处理抑制CD244⁺巨噬细胞的表达，二者联合抑制作用增强；IL-4处理后取上清培养T细胞，T细胞的肿瘤杀伤能力降低，Cino或OX处理的CM可提高T细胞杀伤能力，二者联合显示出更强的杀伤能力。结论 Cino通过靶向抑制CD244⁺巨噬细胞，增强T细胞肿瘤杀伤能力，重塑TME,增强CRC对OX的化疗敏感性。

关键词

T细胞 / 结直肠癌（CRC） / 肿瘤微环境（TME） / 华蟾素（Cino） / 奥沙利铂（OX） / CD244⁺巨噬细胞

基金资助

国家自然科学基金(81903102); 山东省自然科学基金(ZR2023QH153); 山东省中医药科技发展计划项目(2019-0517)