体外诱导多能干细胞定向分化为巨噬细胞的方法

摘要

目的 构建一套操作简便、成本可控的诱导多能干细胞（iPSC）定向分化为巨噬细胞（Mφ）的方案。方法 采用仙台病毒载体将重编程因子导入人脐带血单个核细胞诱导获得iPSC,通过拟胚体途径，并配合骨形态发生蛋白4（BMP4）、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）及白细胞介素3（IL-3）等关键细胞因子将iPSC诱导分化为Mφ。通过流式细胞术、实时荧光定量PCR等方法鉴定Mφ表型、功能及免疫原性相关分子的表达。结果 本方案无需动物滋养层细胞共培养、低氧条件或中间阶段的细胞分选，即可成功获得高纯度的CD14⁺CD11b⁺Mφ,且具有正常的吞噬功能与极化能力。免疫表型分析显示，免疫检查点CD276在iPSC分化为Mφ后细胞阳性率下调，这与β细胞或视网膜上皮细胞分化后CD276表达稳定的情形并不一致。结论 本研究通过无滋养层/低氧/分选的体系成功分化出高纯度Mφ,并首次观察到Mφ分化中CD276谱系依赖性下调现象。

关键词

诱导多能干细胞 / 巨噬细胞 / 拟胚体 / CD276

基金资助

国家重点研发计划(2021YFA1101500)子课题(2021YFA1101502)