新型原代小鼠肺动脉平滑肌细胞的提取方法及鉴定

摘要

目的 建立高效快速的小鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)原代培养方法。方法 新型双酶消化法分离出小鼠PASMC。倒置相差显微镜观察PASMC形态；α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色鉴定其类型及纯度；CCK-8法检测细胞传代后的生长情况；细胞划痕实验评估其对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)的反应性；Western blot法检测在转化生长因子β1(TGF-β1)刺激下原代PASMC蛋白表达变化。结果 光镜下的PASMC为长梭形，阳性率可高达98%,传代后的细胞生长曲线近似“S”形。原代培养的PASMC对PDGF-BB刺激的迁移反应良好；PASMC在TGF-β1刺激下诱导的磷酸化Smad2(p-Smad2)的表达明显增加。结论 通过新型双酶消化法，可显著提高原代PASMC的提取效率与细胞活性，从而为体外实验提供充足且表型稳定的高质量细胞来源。

关键词

肺动脉平滑肌细胞(PASMC) / 双酶消化法 / 原代培养 / 转化生长因子β1(TGF-β1)

基金资助

国家自然科学基金(82570085); 江苏省基础研究计划资助(优秀青年基金项目)(BK20250154)