兔抗小鼠ARRDC5多克隆抗体的制备与应用

李桠如; 许林巍; 袁露; 高雨欣; 申诺; 杨凡; 郑英; 牛长敏

doi:10.13423/j.cnki.cjcmi.010172

细胞与分子免疫学杂志 ›› 2026, Vol. 42 ›› Issue (9) : 813 -817. DOI: 10.13423/j.cnki.cjcmi.010172

兔抗小鼠ARRDC5多克隆抗体的制备与应用

李桠如, 许林巍, 袁露, 高雨欣, 申诺, 杨凡, 郑英, 牛长敏

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摘要

目的制备兔抗小鼠抑制蛋白5(ARRDC5)多克隆抗体。方法分子克隆法构建原核表达重组质粒pET-30a-Arrdc5,将其导入E.coli BL21 (DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导ARRDC5重组蛋白表达。多聚组氨酸标签(His-tag)亲和层析柱纯化重组蛋白，免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。ELISA检测抗体效价。Western blot法检测小鼠睾丸ARRDC5蛋白表达。IP-MS筛选小鼠睾丸中ARRDC5的互作蛋白。结果 pET-30a-Arrdc5原核表达重组质粒经双酶切和测序鉴定正确，IPTG诱导能高效表达ARRDC5蛋白。纯化后获得纯度较高的ARRDC5蛋白，免疫后获得抗体效价达到1∶512 000的多克隆抗体。Western blot法结果表明该抗体能够检测小鼠睾丸中的ARRDC5蛋白。IP-MS筛选到365个ARRDC5的互作蛋白，在精子发生相关过程显著富集。Co-IP实验证实ARRDC5与丙酮酸激酶M2(PKM2)互作。结论本研究成功制备了效价较高、特异性良好的ARRDC5多克隆抗体，为进一步研究ARRDC5在精子发生中的作用和分子机制奠定了基础。