黄芩素调控miR-7对人胃癌BGC-823细胞自噬的影响及其作用机制研究

摘要

目的 研究黄芩素(BAI)通过上调microRNA-7-5p(miR-7)对胃癌细胞系BGC-823细胞自噬的影响及可能的机制。方法 MTT法筛选BAI处理BGC-823细胞的最佳药物浓度。实时定量PCR法检测慢病毒稳定转染miR-7的BGC-823细胞系的转染效率。实验分对照组(mimic-NC)、 miR-7组(miR-7 mimic)及BAI组(即miR-7过表达联合BAI处理组); MTT实验、平板克隆实验和EdU实验检测细胞增殖能力；细胞免疫荧光染色和Western blot法检测了自噬相关16样蛋白1(ATG16L1)、 p62蛋白(p62)、 Bcl2同源结构域蛋白(Beclin 1)、自噬相关蛋白5(ATG5)、微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达水平；网络药理学分析，预测可能的信号通路；Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路相关蛋白的表达水平。结果 50μmol/L的BAI可显著抑制BGC-823细胞的增殖能力；与对照组比较BAI处理后miR-7表达水平显著升高；miR-7组的细胞增殖显著被抑制，且自噬相关分子的蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著上调，促进了BGC-823细胞的自噬体形成，抑制了自噬流的形成；与miR-7组比较，BAI组可进一步抑制BGC-823细胞增殖、诱导细胞自噬体形成但抑制自噬流产生；网络药理学分析BAI、胃癌、自噬共同靶基因可能与PI3K/AKT信号通路相关；与对照组相比，miR-7组p-PI3K、 p-AKT、 p-mTOR的磷酸化水平显著被抑制，BAI组则可进一步抑制这些蛋白的磷酸化水平。结论 BAI介导miR-7抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导BGC-823细胞自噬体的形成并抑制自噬流的产生。

关键词

黄芩素(BAI) / 胃癌 / miR-7 / 自噬体 / 自噬流 / 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)