靶向小鼠Star基因的CRISPR/Cas9系统构建与打靶效力评价

摘要

目的 利用CRISPR/Cas9系统对小鼠Star基因进行精确编辑，构建模拟人类STAR基因突变的细胞模型。方法 选择中国先天性类脂质性肾上腺皮质增生症(CLAH)患者的热点突变区域，并设计相应的单导向RNA(sgRNA)。构建表达sgRNA的重组质粒，将其与慢病毒包装质粒共同转染至HEK-293T细胞并制备慢病毒颗粒以感染小鼠TCMK细胞。采用嘌呤霉素进行病毒感染后阳性细胞的筛选，提取阳性细胞的基因组DNA,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增目标位点的基因组DNA片段，并利用TA克隆和Sanger测序技术，对编辑位点与效率进行统计分析。结果 成功设计了有效的sgRNA序列，并利用CRISPR/Cas9系统成功构建了编辑小鼠Star基因的细胞模型。结论 本研究通过精确编辑小鼠Star基因，成功构建了模拟人类STAR基因突变的CRISPR/Cas9系统，为深入研究CLAH的致病机制及探索潜在治疗方法提供有力工具，具有重要的科学意义和应用价值。

关键词

基因编辑 / CRISPR/Cas9 / 单导向RNA / 小鼠Star基因 / 先天性类脂质性肾上腺皮质增生症