骨肉瘤细胞适配体高质量制备体系的建立

魏唐文; 梁骥; 张宇飞; 王华; 王秀娟; 魏兵

doi:10.19296/j.cnki.1008-2409.2025-02-007

华夏医学 ›› 2025, Vol. 38 ›› Issue (02) : 48 -54. DOI: 10.19296/j.cnki.1008-2409.2025-02-007

骨肉瘤细胞适配体高质量制备体系的建立

魏唐文, 梁骥, 张宇飞, 王华, 王秀娟, 魏兵

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摘要

目的探索肿瘤细胞适配体高质量制备体系建立的可行性。方法构建适配体制备体系：基于细胞-SELEX(Cell-SELEX)经典方法，选用骨肉瘤U2-OS细胞株作为正向筛选靶细胞，人纤维肉瘤HT-1080细胞株作为反向筛选细胞，制备U2-OS适配体文库。从荧光光谱和流式细胞术两种方法中筛选适配体文库制备进程的最佳监测方法。适配体文库扩增体系条件优化。对最终制备的适配体文库与靶细胞结合的特异性进行研究。结果监测方法筛选结果显示，荧光光谱技术更适合作为适配体文库制备的监测技术。适配体文库扩增体系优化结果显示，在12.5μL PCR的扩增体系中，模板量40～41 ng、循环数12～14可作为优化扩增条件。新体系制备的终端文库与两种细胞株特异性鉴定结果显示，目标适配体对U2-OS细胞具有高度亲和性与特异性。结论正向筛选伴随反向筛选、荧光光谱技术以及PCR模板浓度定量优化成功构建骨肉瘤细胞适配体高质量制备体系，为其他肿瘤适配体高质量制备提供了新的思路与途径。