牛蒡子苷元调节Hippo信号通路对黑素瘤细胞化疗耐药性的影响

摘要

目的：探究牛蒡子苷元（Arctigenin,ARG）对黑素瘤细胞化疗耐药性的影响以及该过程中对Hippo信号通路的调节机制。方法：利用不同浓度的维莫非尼（Vemurafenib,VEM）持续培养A375细胞以获得耐药性黑素瘤细胞株A375/VEM;CCK-8检测不同浓度VEM对A375和A375/VEM细胞的增殖活性以及不同浓度ARG对A375/VEM细胞的毒性；将A375/VEM细胞分为对照组、VEM组、ARG组、ARG+VEM组、ARG+VEM+Hippo抑制剂组，CCK-8法检测各组A375/VEM细胞的存活率；克隆形成实验检测各组A375/VEM细胞的增殖情况；流式细胞术检测各组A375/VEM细胞的凋亡情况；Western blot检测各组细胞中Cyclin D1、ERK1/2、p-ERK1/2、AKT、p-AKT及Hippo途经相关蛋白的表达；建立耐药性黑素瘤小鼠移植模型并观察肿瘤生长情况。结果：与对照组相比，VEM组、ARG组及ARG+VEM组A375/VEM细胞的存活率、克隆形成数量、Cyclin D1、p-ERK1/2、p-AKT、Yes相关蛋白（Yes-associated protein,YAP）表达均降低（P<0.05），且ARG+VEM组低于VEM组和ARG组（P<0.05），细胞凋亡率、LATS1、p-YAP水平升高（P<0.05），且ARG+VEM组高于VEM组和ARG组（P<0.05）；与ARG+VEM组相比，ARG+VEM+Hippo抑制剂组A375/VEM细胞的存活率、克隆形成数量、Cyclin D1、p-ERK1/2、p-AKT、YAP表达均升高（P<0.05），细胞凋亡率、LATS1、p-YAP水平降低（P<0.05）；裸鼠移植瘤体内实验发现，ARG+VEM组小鼠肿瘤重量和体积均明显低于VEM组和ARG组（P<0.05）；进一步加入Hippo途径的抑制剂，发现ARG对A375/VEM细胞耐药性的抑制作用被逆转（P<0.05）。结论：ARG可能是通过激活Hippo途径来抑制黑素瘤细胞的化疗耐药性。

关键词

牛蒡子苷元(ARG) / 黑素瘤细胞 / 化疗 / 耐药性 / Hippo信号通路

基金资助

河北省中医药管理局科研计划项目（编号：2021115）