骨髓间充质干细胞移植对自然衰老小鼠免疫功能的调节作用研究

摘要

目的 探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BM-MSCs）移植对自然衰老小鼠免疫功能的调节作用。方法 取幼龄C57BL/6N小鼠骨髓,分离培养BM-MSCs,观察其贴壁生长形态,并通过成骨诱导茜素红染色及流式细胞术对细胞进行表征鉴定。将自然衰老小鼠随机分为对照组和BM-MSCs移植组,每组5只。BM-MSCs移植组经尾静脉注射BM-MSCs悬液,对照组注射等量生理盐水。部分BM-MSCs经绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）标记后用于体内归巢观察。治疗后采用HE染色观察脾脏组织病理形态学变化;采用ELISA检测脾脏组织中白细胞介素-2（interleukin-2, IL-2）和白细胞介素-10（interleukin-10, IL-10）表达水平;采用流式细胞术检测脾脏CD3⁺CD4⁺T细胞和CD3⁺CD8⁺T细胞比例。结果 原代培养的BM-MSCs呈贴壁生长,传代后细胞呈长梭形或多角形并融合成片;成骨诱导后可见茜素红阳性钙化结节;流式细胞术检测显示细胞表面标志物CD44阳性、CD34阴性、CD45阴性,表明所分离培养细胞符合BM-MSCs表型特征。GFP标记后BMMSCs可见明显绿色荧光,且尾静脉输注后可归巢至脾脏组织。与对照组比较,BM-MSCs移植组小鼠的脾脏组织红髓与白髓结构改善,脾小体边缘较完整,巨噬细胞数量减少;脾脏组织中IL-2表达水平升高,IL-10表达水平降低;脾脏CD3⁺CD4⁺T细胞和CD3⁺CD8⁺T细胞比例均明显升高（P<0.05）。结论 BM-MSCs移植能够归巢至自然衰老小鼠脾脏,并通过改善脾脏组织结构、调节细胞因子表达及增加CD3⁺CD4⁺T细胞和CD3⁺CD8⁺T细胞比例,增强机体免疫功能,提示其对免疫衰老具有一定干预作用。

关键词

干细胞 / 移植 / 骨髓间充质干细胞 / 自然衰老小鼠 / 免疫衰老 / 免疫调节 / T淋巴细胞