蒺藜苜蓿苯甲醇O-苯甲酰转移酶MtBEBT的原核表达、纯化及功能预测

摘要

本研究成功构建蒺藜苜蓿苯甲醇O-苯甲酰转移酶MtBEBT的原核表达系统，经诱导条件优化，在0.2 mmol/L IPTG、16℃条件下低温诱导14 h，重组蛋白可溶性表达产量提升至32.7 mg/L培养液。采用Ni²⁺-NTA亲和层析结合Superdex 200分子筛两步纯化策略，获得纯度>95%的重组蛋白（纯化倍数8.2倍，回收率64.3%）。生物信息学分析显示，MtBEBT为碱性亲水蛋白（pI=7.08），二级结构以无规卷曲（47.93%）和α螺旋（35.08%）为主，三级结构模型质量参数GMQE值达0.92。分子对接模拟揭示其与苯甲酰-CoA的亲和力（结合能-7.8 kcal/mol）显著高于苯甲醇（-5.2 kcal/mol），关键活性位点Ala168、Asn290和Arg372通过氢键网络稳定底物结合。本研究建立的表达纯化体系为MtBEBT晶体结构解析提供了材料基础，其活性位点预测结果为酶功能机制研究及植物代谢工程改造提供了理论依据。

关键词

蒺藜苜蓿 / BAHD酰基转移酶 / 分离纯化 / 分子对接 / 活性位点