HER2特异性的驼源纳米抗体制备与筛选

摘要

制备HER2的特异性纳米抗体，为HER2阳性肿瘤的靶向治疗提供新型候选分子。通过生物信息学方法预测HER2胞外Ⅱ区的疏水性、信号肽、跨膜结构以及蛋白的二三级结构；从239T细胞中提取RNA，通过RT-PCR克隆出该区域基因，构建原核表达载体并使用纯化后的蛋白免疫骆驼。从已免疫的骆驼血中提取RNA，直接对抗体的VHH基因进行高通量测序。采用Elisa和SDS-PAGE技术检验纳米抗体，并将大小符合的胶块进行蛋白质质谱测序。基于质谱结果筛选出前5个高丰度的纳米抗体并进行分子对接分析。成功克隆并表达HER2胞外Ⅱ区重组蛋白，且免疫后的骆驼血清效价高达1∶640 000。在高通量测序后，结合质谱结果筛选出5个高丰度纳米抗体（OUT-2334、OUT-8933、OUT-4166、OUT-2966、OUT-2853），其分子对接显示这些纳米抗体均能够与HER2胞外Ⅱ区的关键氨基酸残基结合。成功为HER2阳性肿瘤的靶向治疗提供了新的候选分子，也为纳米抗体的高效筛选提供了方法。

关键词

HER2 / 纳米抗体 / VHH基因 / 高通量测序 / 分子对接