刺葡萄VdWRKY26基因克隆及功能分析

摘要

【目的】探究VdWRKY26基因在刺葡萄果实生长发育中的功能。【方法】从湘刺1号果实中克隆VdWRKY26基因CDS序列，并对其编码蛋白进行氨基酸多重序列比对及系统进化分析；构建VdWRKY26表达载体，并通过烟草瞬时转化法对VdWRKY26进行亚细胞定位分析；通过qPCR技术测定VdWRKY26在刺葡萄不同组织中的表达量；克隆VdWRKY26基因2545 bp的启动子序列，并通过GUS染色试验检测VdWRKY26启动子的活性；最后，通过农杆菌介导法获得VdWRKY26转基因葡萄41B细胞以探究其功能。【结果】成功克隆VdWRKY26的编码序列，其长度为1434 bp，编码477个氨基酸；亚细胞定位结果表明VdWRKY26主要定位于细胞核；qPCR分析表明，VdWRKY26在叶片和果实中的表达水平较高，而在根和茎中的表达水平相对较低；GUS染色分析发现，VdWRKY26基因起始密码子上游2545 bp的启动子区域具有活性；通过在葡萄41B悬浮细胞中同源表达VdWRKY26，初步揭示了其具有调控葡萄苹果酸积累的能力。【结论】成功克隆了VdWRKY26基因的CDS及启动子序列，并对其功能进行了系统分析。首次揭示了VdWRKY26在葡萄果实苹果酸积累中的正向调控作用，为解析葡萄果实风味品质形成的分子机制提供了重要理论依据。

关键词

刺葡萄 / VdWRKY26 / 转录调控 / 亚细胞定位 / 启动子活性 / 苹果酸

基金资助

国家重点研发计划项目（2023VFD1200100）; 国家现代农业产业技术体系项目（CARS-29-Zp-9）