根瘤菌AcrR蛋白表达、纯化及热稳定性分析

摘要

成功克隆并表达纯化根瘤菌Acr R蛋白，同时对其热稳定性特征进行了表征。利用Sticky-End法将Acr R基因插入到表达载体p HAT2中，构建重组质粒p HAT2-Acr R。通过热激法将重组质粒转化至大肠杆菌E.coli BL21（DE3）感受态细胞，并在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）的诱导下表达重组蛋白。结合亲和层析、离子交换层析和凝胶色谱层析等技术获得高纯度的Acr R蛋白，SDS-PAGE显示其分子量约为23.56 k Da。生物信息学分析预测，Acr R基因片段长度为606 bp，共编码201个氨基酸残基，等电点（p I）为5.74，总原子量为3 168，分子式为C₉₉₃H₁₅₇₇N₂₈₅O₃₀₀S₁₃，该蛋白缺乏跨膜结构域，被归类为亲水性不稳定蛋白。进一步热稳定性实验（TSA）发现，Acr R蛋白在50 mmol/L Citric acid、500 mmol/L Na Cl、p H 5.0的缓冲液中展现出较高的热稳定性。这些发现为理解Acr R蛋白的生物学特性及后续的晶体结构解析和功能研究提供了实验数据。

关键词

根瘤菌 / AcrR基因 / 蛋白纯化 / 热稳定性分析

基金资助

国家自然科学基金项目（32170020,31860001）