CMTM6对幽门螺杆菌感染的胃上皮细胞中PD-L1的作用

付玮; 宁静; 付伟伟; 张静; 丁士刚

doi:10.19723/j.issn.1671-167X.2025.02.004

北京大学学报（医学版） ›› 2025, Vol. 57 ›› Issue (02) : 245 -252. DOI: 10.19723/j.issn.1671-167X.2025.02.004

CMTM6对幽门螺杆菌感染的胃上皮细胞中PD-L1的作用

付玮, 宁静, 付伟伟, 张静, 丁士刚

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摘要

目的：探索幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染后胃黏膜上皮细胞中含MARVEL结构域的CKLF样因子6(CKLF-like MARVEL transmembrane domain-containing 6,CMTM6)、程序性死亡配体(programmed death-ligand 1,PD-L1)表达水平变化及CMTM6对PD-L1的调控作用，并通过微列阵分析探索CMTM6基因敲除前后Hp感染的胃黏膜上皮细胞mRNA表达差异变化情况。方法：将Hp标准菌株ATCC 26695与人胃黏膜上皮细胞GES-1共培养6 h、24 h及48 h,通过实时荧光定量PCR及免疫印迹法检测CMTM6及PD-L1表达水平。利用CRISPR/Cas9技术构建CMTM6基因敲除质粒并敲除GES-1细胞的CMTM6基因。将Hp分别与CMTM6基因敲除和野生型GES-1细胞共培养48 h,检测PD-L1转录及蛋白质水平的变化，并利用蛋白酶体抑制剂MG-132处理CMTM6基因敲除GES-1细胞，检测PD-L1蛋白水平变化。利用Agilent Human ceRNA Microarray 2019对与Hp共培养48 h的CMTM6基因敲除和野生型GES-1细胞进行mRNA微列阵分析，得到差异表达基因并通过日本京都基因与基因组百科(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)数据库分析差异表达基因富集的信号通路。结果：Hp感染后，GES-1细胞的CMTM6、PD-L1的mRNA及蛋白水平均明显上调，CMTM6 mRNA在感染后48 h上调最明显。CMTM6基因敲除后，Hp感染的GES-1细胞CD274基因转录水平无明显变化，但PD-L1蛋白水平明显下调，应用蛋白酶体抑制剂MG-132处理后PD-L1水平回升。CMTM6基因敲除后，67个基因表达差异达到2倍以上，其中TMEM68、FERMT3、GPR142、ATP6V1FNB、NOV、UBE2S等基因转录水平明显下调，PCDHGA6、CAMKMT、PDIA2、NTRK3、SPOCK1等基因转录水平明显上调。CMTM6基因敲除后，编码泛素结合酶E2S(ubiquitin-conjugating enzyme E2S,UBE2S)的基因表达明显下调，可能影响蛋白质泛素化降解。CMTM6基因敲除后，编码肾上腺素能受体α1B(adrenoceptor alpha 1B,ADRA1B)、乙酰胆碱毒蕈碱受体M1(cholinergic receptor muscarinic 1,CHRM1)及血小板活化因子受体(platelet activating factor receptor, PTAFR)的基因表达明显上调。结论：Hp感染上调胃黏膜细胞CMTM6水平，CMTM6发挥稳定PD-L1的作用；CMTM6基因敲除可能影响蛋白质泛素化降解、细胞表面受体表达。