敲减Blimp1基因表达对CCl₄诱导的小鼠肝纤维化模型早期肝损伤的保护作用

摘要

目的：探讨敲减转录因子B淋巴细胞诱导成熟蛋白1（B lymphocyte induced maturation protein 1,Blimp1）基因对四氯化碳（carbon tetrachloride, CCl₄）诱导的小鼠肝纤维化模型早期肝损伤的保护作用。方法：采用C57BL/6小鼠腹腔注射5%（体积分数）CCl₄橄榄油溶液制备肝纤维化小鼠模型，采用小鼠腹腔注射短发夹RNA （short hairpin RNA, shRNA）腺相关病毒（adeno-associated virus, AAV）敲减Blimp1基因表达。将小鼠随机分为3组，空白实验组（n=10）,无意义RNA对照组（n=10）和Blimp1敲减组（n=10）。CCl₄诱导的小鼠肝纤维化模型制备27 d后取材，通过Western blot和real-time PCR检测小鼠肝组织Blimp1蛋白、α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（collagen typeⅠalpha 1, COL1A1）、Ⅲ型胶原蛋白（collagen typeⅢalpha 1, COL3A1）及其mRNA表达水平；测定各组小鼠血清中天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase, AST）、丙氨酸氨基转移酶（alanine transaminase, ALT）水平；采用苏木素-伊红染色、Masson染色和天狼星红染色法鉴定小鼠肝组织的病理变化及肝纤维化程度。结果：与空白实验组相比，无意义RNA对照组小鼠肝脏Blimp1蛋白表达水平显著升高（2.036±0.244,t=3.690,P=0.002）,Blimp1敲减组小鼠Blimp1蛋白表达降低至基础水平（0.783±0.249,t=6.223,P=0.003）。与无意义RNA对照组小鼠血清ALT [（1 957.8±633.6） U/L]和AST [（1 808.8±260.1） U/L]相比，Blimp1敲减组小鼠血清ALT [（894.0±360.1） U/L,t=3.998,P=0.003]和AST [（820.0±100.6） U/L,t=6.141,P=0.004]水平均显著降低，肝组织炎性细胞浸润减少、纤维化程度减轻，肝脏α-SMA（0.676±0.064,t=7.930,P=0.001）、COL1A1（1.426±0.143,t=6.364,P=0.003）、COL3A1（1.124±0.198,t=3.440,P=0.026）蛋白表达水平降低，且mRNA表达与蛋白水平变化一致。结论：Blimp1在CCl₄诱导的小鼠肝纤维化中发挥重要作用，敲减Blimp1表达有利于保护小鼠的早期肝损伤。

关键词

肝纤维化 / 肝损伤 / 动物模型 / B淋巴细胞诱导成熟蛋白1