左金丸中吴茱萸生物碱和小檗碱联合用药对HepG2细胞毒性的影响

摘要

目的：研究左金丸中吴茱萸生物碱和小檗碱联合用药对肝细胞毒性的影响，探讨联合用药的减毒机制。方法：参照左金丸中各化学成分吸收入血的峰浓度(maximum concentration, Cmax)确定成分配伍比例，采用HepG2细胞模型研究吴茱萸中肝毒性成分吴茱萸碱(evodiamine, EVO)、去氢吴茱萸碱(dehydroevodiamine, DHED)与小檗碱联合用药48 h的细胞毒性。实验分为溶剂对照组、EVO组、DHED组、小檗碱组，以及EVO或DHED与小檗碱的联合用药组。以细胞计数试剂盒法(cell counting kit-8,CCK-8)测定细胞存活率，并采用联合指数判断药物的毒性作用。检测细胞上清液中谷丙转氨酶(alanine transaminase, ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性及总胆红素(total bilirubin, TBIL)含量。采用Western blot检测胆汁酸转运体胆盐输出泵(bile salt export pump, BSEP)和多耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的表达水平。检测HepG2细胞丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性。结果：与EVO或DHED组相比，EVO 1μmol/L与小檗碱10μmol/L联用、DHED 50μmol/L与小檗碱35μmol/L联用，均可显著提高HepG2细胞的存活率(P<0.01),其联合指数值分别为77.89和4.49,远大于1。联用小檗碱可降低细胞上清液中ALT、AST、LDH和ALP活性，并减少TBIL含量(P<0.05、P<0.01)。与EVO组相比，EVO联用小檗碱可上调BSEP和MRP2蛋白表达；与DHED组相比，DHED联用小檗碱可显著下调BSEP和MRP2蛋白表达(P<0.01)。EVO或DHED与小檗碱联用均可显著减少MDA含量(P<0.05、P<0.01)。结论：一定配比的小檗碱与EVO或DHED联用，对其HepG2细胞毒性具有拮抗作用，其减毒作用的机制与调节胆汁酸转运体表达、减轻脂质过氧化损伤有关。

关键词

吴茱萸碱 / 去氢吴茱萸碱 / 小檗碱 / 中药毒性 / 化学性与药物性肝损伤