不同药物对鸡沙门氏菌病治疗的研究

Treatment of Salmonella in chicken with different drugs

摘要

目的 为比较研究临床上常用药物对鸡沙门氏菌病的治疗效果，筛选出合理治疗药物，避免抗生素的盲目使用。 方法 将具有清热解毒和一定抗菌消炎的复方中药组方优化后与硫酸卡那霉素、恩诺沙星、氯霉素、磺胺甲恶唑进行药敏试验和治疗比较试验。 结果 磺胺甲恶唑，高敏感株占比达86.6%，治愈率达86%；复方中药高敏感株占比73.4%，治愈率76%；硫酸卡那霉素、氯霉素高敏感株占比分别为80%、76.7%，略高于复方中药，治愈率分别为64%、66%，低于复方中药组；恩诺沙星高敏感株占比为56.7%，治愈率为58%，效果较差。 结论 复方中药对沙门氏菌有一定的抑菌和抗菌作用，中西药结合对疾病有很好的治疗和预防作用。

关键词

沙门氏菌 / 病理变化 / 药敏试验 / 治疗试验 / 鸡 / 替抗药物

Key words

Salmonella / pathological changes / drug sensitivity test / therapeutic test / chicken / drug instead of antibiotics

鸡沙门氏菌病由不同日龄鸡感染某种血清型沙门氏菌而引起的一类传染性疾病。按照鸡感染日龄、病理变化及临床症状等不同，一般分为鸡白痢病、鸡伤寒、鸡副伤寒，大多数病鸡感染单一血清型，也有时会出现混合感染的现象。近年来与新城疫、传染性喉炎、鸡大肠杆菌病等混合感染病例较多。由于不同鸡场感染沙门氏菌血清型不同，再加上持续性混合继发感染，严重威胁养鸡业。用于治疗沙门氏菌病的药物大多数为抗生素，而且有些鸡场通常在鸡饲料或饮水中添加抗生素，使得鸡群体内微生态遭到破坏，各项生理机能失衡^[1]。又因在鸡群发病后盲目、持续重复给药，使得感染菌株产生耐药性，造成药物治疗不理想，鸡群一旦发病，疫情难以控制，鸡产品流入市场，不仅造成该病在一定区域内流行传播，甚至威胁人类健康。

1 材料与方法

1.1 试验材料

LB培养液；PBS缓冲液；麦康凯琼脂、普通琼脂、普通琼脂斜面均按文献[2]配制。药敏试验纸硫酸卡那霉素，30 μg/片；恩诺沙星，30 μg/片；氯霉素，20 μg/片；磺胺甲恶唑，30 μg/片，均购于某生物制药公司。某鸡场140日龄发病鸡300只及实验室常用仪器：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、pH试纸、漏斗、滤纸、高压蒸汽灭菌锅、平皿、解剖器械等。

中药组方：黄柏15 g、黄连20 g、秦皮15 g、焦楂15 g、肉豆蔻20 g、五倍子12 g、二花20 g、栀子15 g、前胡15 g、甘草10 g，加适量水浸泡3 h后煎煮45 min，用滤纸过滤后获得药液备用^[2]。

1.2 血液涂片镜检与病死鸡剖检

病死鸡必须在2 h内进行剖检。在无菌条件下打开病死鸡腹腔，用灭菌干棉球吸取肝脏表面渗出液，手术器械经火焰消毒后采取1小块肝组织，用肝组织切面进行均匀触片，自然晾干后经吉姆萨–瑞氏染色镜检。

整个剖检过程严格遵守无菌操作，防止病鸡在剖检过程中出现各种污染。剖检过程中，仔细观察病死鸡各内脏器官的病理变化并做好记录。

1.3 病原菌分离培养

无菌采取病死鸡充血、出血或具有其他明显病理变化的肝和肾组织共60份，经仔细研磨后用PBS液混匀，并进行反复吹打，制备成PBS悬液，并将PBS悬液过滤后获取滤液。将滤液在无菌操作条件下采用接种环分别接种于普通琼脂和麦康凯琼脂培养基上，37 ℃恒温箱培养18~24 h，挑选麦康凯琼脂平板上卵圆形隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、半透明的无色小菌落接种于普通琼脂斜面进行纯培养，培养后胶塞密封，置于4 ℃冰箱保存备用^[3]。

1.4 药敏试验

将分离生长良好的纯菌株接种于LB培养液中，37 ℃，210 r/min培养12 h；培养菌液在4 ℃，3 200 r/min离心10 min，弃去上清液；用PBS液反复冲洗沉淀物并稀释至15 mL，多次吹打混匀。

1）吸取100 μL稀释液均匀涂布于营养琼脂平板，再放入药敏纸片，于37 ℃培养24 h，观察测量抑菌圈的大小并记录结果。

2）吸取100 μL稀释液均匀涂布于营养琼脂平板，在营养琼脂平板中央滴加30 μL中药液，于37 ℃培养24 h，观察测量抑菌圈的大小并记录结果。

判定标准：抑菌圈直径＜7 mm为抗药，直径在7~12 mm为中度敏感，直径＞12 mm为高度敏感。

1.5 治疗效果试验

选取140日龄发病鸡300只，随机分成6组，每组50只，各组给药情况分别采取自由饮水与采食。第Ⅰ组饮服硫酸卡那霉素20 IU/L（H₂O）；第Ⅱ组饮服恩诺沙星30 mg/L（H₂O）；第Ⅲ组饲喂氯霉素3 g/kg（饲料）；第Ⅳ组饲喂磺胺甲恶唑100 mg/kg（饲料）；第Ⅴ组饲喂中药组方药液300 mL/L（H₂O）；第Ⅵ组为对照组，不做治疗^[4]。

2 结果与分析

2.1 剖检与血液涂片镜检结果

1）病理变化。对病死鸡进行剖检发现，大多数病死鸡肝脏发生肿大，呈古铜色，并伴随充血、出血现象，呈铜绿色。部分鸡肝脏表面存在乳白色坏死结节，质地变脆；胆囊肥大，胆囊壁变薄，胆汁呈墨绿色；脾脏充血肿胀，质地变脆，被膜紧张，并伴有针尖大小的出血点；肺脏呈土黄色，肺切迹缘有淤血现象，在肺纵隔面有坏死结节；心肌有灰白色的肉芽肿；盲肠肿大，肠腔内充有气体，在回盲口出现充血现象，部分鸡在肠腔内形成柱状“肠芯”；肌胃和腺胃存在灰白色的坏死灶^[5]。部分病鸡腹腔内发生肠黏连，卵黄性腹膜炎、输卵管炎、卵巢炎等。严重病鸡各内脏器官相互黏连成块（图1）。

2）血液涂片镜检结果。通过血液涂片染色后在显微镜下观察，发现白细胞显著增多，其中单核细胞数量增多明显，中等淋巴细胞和浆细胞增多，嗜中性颗粒白细胞、嗜碱性颗粒白细胞体积显著增大，嗜酸性颗粒白细胞形态和体积变化不明显。在视野内发现无芽孢杆状菌体（图2）。

2.2 病原菌分离培养结果

采集病鸡肠道内容物经PBS液冲洗过滤后，将过滤液接种在普通固体培养基培养后，挑取单个典型的菌落（图3）进行细菌分离纯培养，获得了生长良好的纯种沙门氏菌某种血清型的菌落（图4）。

2.3 药敏试验分析

由表1可以看出，磺胺甲恶唑高敏感株占比最高，为86.6%，中敏感株4株，无抗药株；硫酸卡那霉素、氯霉素高敏感株比分别为80.0%和76.7%，略高于复方中药高敏感株占比，但复方中药只有1株抗药株，而硫酸卡那霉素、氯霉素抗药株分别为3、2株。中敏感株比较发现，复方中药为7株，硫酸卡那霉素、氯霉素分别为3、5株，复方中药中高敏感株数略高于硫酸卡那霉素和氯霉素的中高敏感株数，说明三者抗菌、抑菌效果相当。恩诺沙星在药敏试验中高敏感株占比是所试药物中最低的。

2.4 药物治疗试验分析

选择经诊断为沙门氏菌病鸡按试验要求给药治疗后，结果如表2所示。

由表2可知，磺胺甲恶唑的治愈率最高，达到86%，死亡数、死亡率及复发数均为最低，治疗效果较好。

虽然复方中药、硫酸卡那霉素和氯霉素的抗菌、抑菌效果相当，但复方中药治疗效果明显高于硫酸卡那霉素和氯霉素。恩诺沙星的治愈率为58%，是所试药物中治愈效果最差的。

3 讨论

病死鸡经剖检发现，几乎内脏器官都出现不同程度的充血和出血，各实质性器官质地变脆，盲肠扁桃体充血肿大，肠腔内充满气体，肠壁变薄等典型病理变化，个别病死鸡的心脏、肺脏出现坏死结节，结合血液涂片镜检，说明该鸡群感染沙门氏菌病^[6]。

药敏试验发现，从病鸡群体中分离的30株沙门氏菌对磺胺甲恶唑的敏感性最高，高敏感株占比达86.6%，结合治疗，观察到患鸡病情好转，采食量逐渐恢复，腹泻症状减轻。在连续给药3 d后，大多数鸡的食欲恢复正常，治愈率达86%，病死率为4%。

新分离的30株沙门氏菌对复方中药的敏感性在所有药敏试验中表现一般，高敏株占比为73.4%，但中敏株较高，抗药株仅为1株，复方中药对沙门氏菌不仅具有一定的抗菌能力，同时具备较低的耐药性。结合治疗效果发现，复方中药在试验药物中治疗效果较好，治愈率为76%，病死率为8%，病死率仅次于磺胺甲恶唑，说明复方中药虽然在机体外抗菌性一般，但在机体内抗菌、抑菌效果较好，这可能是复方中药能够激活体内各种免疫因子，调节动物内环境稳态平衡，协调各系统生理机能，并与动物机体各种免疫活性因子相互配合，达到抗菌、抑菌的效果，复方中药在机体内的作用和调节机制还需进一步研究。

硫酸卡那霉素、氯霉素对沙门氏菌的药敏试验中，高敏感菌株占比相当，结合治疗发现，治愈率分别为64%和66%，死亡率分别为14%和12%，治愈率和死亡率也相当。虽然硫酸卡那霉素、氯霉素对沙门氏菌具有很好的抗菌和抑菌效果，但在治疗鸡沙门氏菌病的效果并不明显，可能与该养殖场长期使用这2种药物所引起耐药性有关。恩诺沙星的药敏试验中敏感株占比最低，结合治疗试验发现治愈率只有58%，而死亡率达到34%，说明该鸡群中分离的沙门氏菌血清型对恩诺沙星产生严重的耐药性，应谨慎选择用药^[7]。

本研究结果发现，虽然磺胺甲恶唑各方面表现优秀，但长期、大剂量使用，难免会产生耐药性。作为广谱抗菌药，对球菌、杆菌有很好的抗菌和抑菌作用，同样和其他抗生素都会损伤动物体的各种器官和组织。大剂量使用其原型，代谢产物会残留在动物体内，对人类健康造成一定的威胁。复方中药对沙门氏菌有一定的抑菌和抗菌作用，但主要通过调节机体各系统的生理机能，同时能诱导机体分泌各种活性因子，并与动物机体整体抵抗病原菌。因此，选择复方中药对于一些疫病具有很好的治疗和预防作用^[8]。

参考文献

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[2] 王菊梅. 新疆部分地区鸡源沙门氏菌分离鉴定与防治技术研究[D]. 乌鲁木齐： 新疆农业大学， 2015.

[3] 方翟. 湖北省鸡源沙门氏菌的分离鉴定和耐药性分析[D]. 武汉： 华中农业大学， 2014.

[4] 孙化露， 姜逸. 动物源性沙门菌的血清型、生物被膜形成能力和耐药性分析[J]. 畜牧兽医学报， 2012，43(10)：1630-1638.

[5] 董洪燕， 缪晓斌. 鸡白痢沙门菌分离株的耐药性及磺胺类耐药机制研究[J]. 中国家禽， 2010，11(9)：13-14.

[6] 孙和梅. 延庆县柴鸡鸡白痢沙门氏菌病的调查及综合防治[D]. 北京： 中国农业科学院， 2009.

[7] 杨晓林， 陈英， 余松城， 1株鸽源鸡杆菌复合群3的分离和鉴定[J]. 浙江大学学报（农业与生命科学版）， 2014，40（3）：249-256.

[8] 薛俊龙， 田林君， 张国权， 山西省鸡沙门氏菌病流行病学调查分析[J]. 山西农业科学， 2010，38（9）：58-62.