猪粪中氧氟沙星酶联免疫吸附分析法的构建及应用

张婧; 吴雨珊; 吴芸敏; 王博; 吴剑平; 严凤

doi:10.13300/j.cnki.cn42-1648/s.2024.08.007

养殖与饲料 ›› 2024, Vol. 23 ›› Issue (08) : 31 -34. DOI: 10.13300/j.cnki.cn42-1648/s.2024.08.007

养殖生产

猪粪中氧氟沙星酶联免疫吸附分析法的构建及应用

张婧 ¹ ,
吴雨珊 ¹ ,
吴芸敏 ² ,
王博 ¹ ,
吴剑平 ¹ ,
严凤 ¹^,^*

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Establishment and application of ELISA for ofloxacin in pig manure

Jing ZHANG ¹ ,
Yushan WU ¹ ,
Yunmin WU ² ,
Bo WANG ¹ ,
Jianping WU ¹ ,
Feng YAN ¹^,^*

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摘要

目的为粪便中其他小分子抗菌药物的酶联免疫分析方法的构建提供技术借鉴，实现猪粪中氧氟沙星禁用抗菌药物的养殖全过程管理。方法采用碳二亚胺法，将氧氟沙星（OFL）与载体蛋白牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）偶联，制备出人工抗原OFL-BSA和OFL-OVA。使用OFL-OVA抗原制备氧氟沙星单克隆抗体，使用OFL-BSA作为包被抗原建立氧氟沙星间接竞争酶联免疫吸附（ELISA）方法。风干的猪粪样品经醋酸-醋酸钠溶液（pH约4.0）与甲醇的混合液（1∶3，V/V）提取及稀释后测定。结果建立的氧氟沙星间接竞争ELISA方法在标准溶液浓度范围（0~81 ng/mL）内线性良好（r>0.99），方法检测限为3.5 µg/kg。不同添加浓度的氧氟沙星回收率为70.8%~86.8%，变异系数为0.7%~4.7%。应用该法检测79份猪粪实际样品，检测结果与液相色谱-串联质谱法的分析结果具有良好的一致性。结论该方法准确、灵敏、快捷，可用于猪粪中氧氟沙星残留的快速分析。