布鲁氏菌基因缺失株TaqMan荧光定量PCR检测方法

Establishing a method for detecting the deletion strains of Brucella gene with TaqManfluorescence quantitative PCR

摘要

目的 建立布鲁氏菌基因缺失株荧光定量PCR方法，为其他布鲁氏菌毒株和基因缺失株鉴别诊断提供技术支持。 方法 根据GenBank中布鲁氏菌赤藓糖醇基因（eryA基因）设计合成特异性引物和探针，对引物、探针浓度、退火温度等反应条件进行优化后，检测该方法的特异性、敏感性和重复性。 结果 重组质粒标准品在1.56×10⁸ ~1.56×10 copies/μL呈良好线性关系；特异性试验结果显示，该方法对其他14种常见细菌病毒均无交叉反应；敏感性试验结果显示该方法对布鲁氏菌的检测敏感度为100 copies/μL。重复性试验结果显示，组内和组间变异系数均小于2%。 结论 TaqMan荧光定量PCR检测方法特异性强、灵敏度高、稳定性好，可用于布鲁氏菌基因缺失株和其他布鲁氏菌株的鉴别诊断。

关键词

布鲁氏菌 / TaqMan荧光定量PCR / 检测方法 / 鉴别诊断 / 基因缺失

Key words

Brucella / TaqMan fluorescence quantitative PCR / method of detection / identification and diagnosis / gene deletion