一起仔猪PRV、PCV2、PEDV混合感染的诊断与综合防控

Diagnosis and comprehensive prevention and control of mixed infection of PRV, PCV2, and PEDV in a piglet

摘要

[目的]诊断贵州省某生猪养殖场仔猪异常发病死亡原因，为生猪养殖场疾病防控提供参考。[方法]无菌采集2头3～14日龄患病仔猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、淋巴结等组织，采用临床观察、病理剖解、细菌分离培养、荧光定量PCR检测等实验室诊断方法进行诊断。[结果]临床观察病猪出现食欲不振、体形消瘦、体温升高等症状；病理剖检可见其腹腔内有积液，肠透明充气；肠系膜淋巴结充血；胃溃疡；脾脏边缘坏死。细菌分离培养未长出菌落；荧光定量PCR检测结果为猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒有明显的指数增长曲线，口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒无Ct值。[结论]该猪场死亡仔猪存在猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒混合感染，主要防控方法为疫苗免疫和提高生物安全防护。

关键词

仔猪 / 病理剖解 / 细菌分离培养 / 混合感染 / 综合防控

Key words

piglet / pathological dissection / isolation and culture of bacteria / mixed infections / comprehensive prevention and control

猪伪狂犬病是猪伪狂犬病毒（PRV）引起的高度接触性、热性传染病^[1]，生猪感染后主要症状为怀孕母猪流产、产木乃伊胎，仔猪出现发热、奇痒和神经症状，成年猪常存在隐性感染^[2]。解剖患病猪可见其扁桃体、上呼吸道淋巴结出血、坏死，肺脏出血、坏死，通常没有典型的病理变化。猪圆环病毒病是猪圆环病毒（PCV）引起的多系统、免疫抑制疾病^[3]，猪圆环病毒分为1型、2型、3型和4型，猪圆环病毒2型（PCV2）主要引起断奶仔猪多系统衰竭综合征和呼吸系统疾病综合征，对仔猪的危害最大^[4]。最显著的剖检病变是全身淋巴结肿大，特别是肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结异常肿大，肺脏肿胀、变硬，脾脏肿大、干燥萎缩、形成花斑肝，肾脏肿大、花斑肾。猪流行性腹泻是猪病毒性腹泻病毒（PEDV）引起的高度接触性、传染性肠病，生猪感染后主要引起仔猪腹泻、脱水、呕吐等症状^[5]；剖解可见整个小肠肠管扩张，内容物稀薄，呈黄色、泡沫状，肠壁弛缓，缺乏弹性，变薄有透明感，肠黏膜绒毛严重萎缩，胃底充血、出血。猪病毒性腹泻病毒常与猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒混合感染，猪伪狂犬病、猪圆环病毒2型和猪病毒性腹泻常发生在各生猪养殖场，严重影响生猪产业的发展，造成较大的经济损失。

贵州省都匀市某生猪养殖场，存栏母猪50头、仔猪250余头。根据养殖人员描述，2024年2月，1周内有3~14日龄仔猪连续出现腹泻、扎堆嗜睡、食欲减退、消瘦、被毛粗乱等症状，发病仔猪有50余头，死亡10余头，母猪怀孕前已免疫口蹄疫、猪瘟、蓝耳病、猪伪狂犬病、猪圆环病毒等疫苗，猪场未免疫猪病毒性腹泻疫苗。笔者初步怀疑为病毒性传染病感染，为进一步确诊感染疾病，采用临床观察、病理剖解、细菌分离培养、荧光定量PCR检测等方法进行诊断。

1 材料与方法

1.1 病料采集

选取临床症状较重的病猪，无菌采集2头病仔猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、淋巴结等组织；采集病猪小肠内容物备用。

1.2 检测试剂

细菌分离培养试剂兽医实验室自行制备，口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测试剂、猪瘟病毒荧光RT-PCR检测试剂、猪伪狂犬病毒荧光PCR检测试剂、猪圆环病毒2型荧光PCR检测试剂、猪流行性腹泻病毒/猪轮状病毒/猪传染性胃肠炎病毒三重荧光RT-PCR等检测试剂购自深圳市莱孚生物科技有限公司。

1.3 临床观察与病理剖检

观察发病猪临床症状，对临床症状较为严重的2头仔猪进行剖解，观察仔猪腹腔是否有积液，内脏是否存在充血、出血、坏死等症状，小肠是否存在充气、透明等，肠系膜淋巴结是否存在肿大、充血、出血等。

1.4 实验室检测

1）细菌分离培养：无菌采集患病猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、淋巴结等组织，分别接种到鸡鲜血平板上，在37 ℃培养箱内过夜培养，同时在无氧环境下进行培养。

2）病毒感染检测：分别适量采集患病猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、淋巴结等组织和小肠内容物，研磨后加入0.5 mL无菌生理盐水混匀后，低速离心5 min，取上清，提取核酸。按照试剂盒说明书进行扩增。

2 结果与分析

2.1 临床与剖解结果

发病猪被毛凌乱、食欲不振、扎堆、嗜睡、体温升高、体形消瘦。剖检可见其腹腔内有积液，肠透明充气(图1)；肠系膜淋巴结充血（图2）；胃溃疡（图3）；肺出血斑（图4）；脾脏边缘坏死（图5），其他脏器未见异常。

2.2 细菌分离培养结果

在37 ℃培养箱内分别进行有氧和无氧培养，24 h后观察菌落生长情况，未发现菌落。

2.3 病毒核酸检测结果

按照试剂盒说明书，分别进行口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒核酸检测。检测结果显示，2头病死猪组织样本均扩增到猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型核酸，1头病死猪粪便样本扩增到猪流行性腹泻病毒核酸，但检测样本中未扩增到口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒核酸。表明病猪存在猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒感染。

3 讨论

本试验采用流行病学调查、临床观察、病理剖解、细菌分离培养、荧光定量PCR检测等实验室诊断方法确诊生猪养殖场仔猪异常死亡的原因，临床观察发现，发病猪被毛凌乱、食欲不振、扎堆、嗜睡、体温升高、体形消瘦；病理剖检可见病猪腹腔内有积液，肠透明充气，肠系膜淋巴结充血，胃出血溃疡，脾脏边缘坏死；细菌分离培养未长出菌落。病毒核酸检测结果为猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒核酸阳性，口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒均为核酸阴性。确诊引起仔猪异常死亡的病因为猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒混合感染。

病毒性传染病的治疗无特效药物，主要防控手段为疫苗免疫和提高生物安全防护措施^[6]。做好疫苗接种，制定科学的免疫程序，根据猪场所在地区的疫病流行情况和猪群的实际情况制定合理的免疫程序^[7]。对于猪瘟、猪蓝耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒病、猪圆环病毒等常见繁殖障碍疾病，要按照规定的免疫程序进行疫苗接种。猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒等腹泻疫病，要针对发病情况确定疫苗免疫病种，有发病流行情况的要及时纳入免疫程序。选择优质疫苗，针对发病流行毒株选择核酸同源性高的毒株进行免疫，确保疫苗的质量和有效性。接种疫苗时，要严格按照操作规程进行，确保接种剂量准确，接种途径正确^[8]。同时，要做好疫苗的保存和运输工作，避免疫苗失效。

加强饲养管理，保持良好的通风和采光^[9]。猪舍内要保持清洁干燥，温度、湿度适宜。科学饲养，根据猪的不同生长阶段和生理需求，提供营养均衡的饲料。保证饲料的质量，避免使用发霉变质的饲料^[10]。贵州地区常年阴雨较多，空气潮湿，在购买饲料时，要根据饲料的使用量，有计划地分批购买，避免饲料大量长时间保存产生霉变。各日龄猪群在更换饲料时要循序渐进，尽量避免突然更换饲料造成猪群产生应激反应，导致抵抗力下降。定期检测饮用水源水质，要保证猪群有充足的清洁饮水。合理控制饲养密度，避免饲养密度过大，减少猪群之间的接触和应激。制定严格的清洗消毒程序，严格落实，每日清扫猪舍内粪便，定期清理化粪池内的污物，保持圈舍清洁。空栏消毒时，要将圈舍周边的辅助物彻底清理，所有粪便清理干净、清水冲洗，通风干燥后，再使用消毒药品进行消杀。带猪消毒时要使用刺激性较小的消毒药，减少应激反应。消毒剂要定期更换，配制适宜的浓度，不能大幅降低或者提高配比浓度，以免降低消毒效果和产生药物的耐药性。建立完善的生物安全体系，严格执行生物安全措施，严格限制外来人员和车辆进入猪场，进入猪场的人员和车辆必须经过严格的消毒。猪场周围要设置围墙和防疫沟，防止外来动物进入。

加强疫病监测，定期对猪群免疫抗体检测，不合格的及时进行补免，确保免疫效果。加强猪群临床巡视，观察生猪每日采食量、饮水、精神状态等，发现猪只体温升高、精神萎靡、拉稀等异常情况，要隔离病猪，开展诊断，查明感染原因，及时处理。病毒性疾病的诊断除了结合临床症状外，还要综合选择实验室检测手段进行诊断，常将临床症状观察、病理剖解、抗体检测和PCR、荧光定量PCR等方法相结合，进行快速诊断，提高疫病诊断的准确性。建议进行自繁自养，确需要引进种猪的，要选择健康、无疫病的种猪^[11]。引进后，要进行严格的隔离观察和检疫，确保种猪健康无病后才能合群饲养。加强种猪保健，定期对种猪进行保健，包括驱虫、健胃、补充维生素和微量元素等^[12]。同时，要注意观察种猪的发情、配种、妊娠等情况，及时发现和处理问题。

参考文献

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