在蛋鸡养殖场,大肠杆菌病是一种最常见的细菌性传染病,大肠杆菌病在养鸡场发病率非常高,通常可达30%~60%。一旦发病,不仅可以导致蛋鸡生长发育迟缓,严重时可以引起蛋鸡死亡
[1],给养殖场造成危害和经济损失。
当前研究主要集中于对其防治方法的探索,主要是采用中草药单体治疗,并通过改变剂型来提升药效,也有对中草药方剂的研究,不同药物组方或者相同药物配比组合等来研究治疗效果;还有大量研究应用益生菌或者噬菌体来防治该病
[2-3],均可以达到良好的效果。
1 病原简介
鸡大肠杆菌通常呈杆状,长度为1~3 μm,宽度为0.5~0.7 μm,一般以单个或者成对的形式存在,也可能在某些条件下形成链状或簇状群体;具有典型的革兰氏阴性细菌的细胞壁结构,包含1层较薄的肽聚糖层和外膜,外膜上有脂多糖(LPS)。细胞膜在细胞壁内,负责物质的进出。有些大肠杆菌具有鞭毛,表现为运动性,可以在液体培养基中游动。某些特定株具有菌毛,能够黏附在宿主的肠道上,增强其定殖能力。细胞内的DNA以核小体形式存在,构成细菌的遗传物质,某些鸡大肠杆菌还包含质粒,这是一种小型环状DNA,能够携带抗药性基因或其他有利生存的基因。一些鸡大肠杆菌株能够产生抗药性,抵抗多种抗生素,例如青霉素、四环素等。抗药性基因通常通过质粒或转座子在细菌之间传播,使得它们在抗生素存在的环境中存活。
鸡大肠杆菌能够在一定的温度范围内存活,尽管其最适生长温度为37 ℃,某些耐热株可以在更高温度下生存,增加了其在开放环境中的适应能力。通常大肠杆菌在60 ℃的环境中仅可以存活20 min。大肠杆菌最适pH值在7.2~7.4,在pH值变化较大的环境中有一定的耐受能力,能够在酸性或碱性介质中存活,极端pH条件可能会影响其生长。在干燥或营养较少的环境中,鸡大肠杆菌能够形成休眠状态,以较低的代谢率存活,待条件改善后重新繁殖。大肠杆菌能够形成生物膜,这时细菌集聚在表面,周围包裹有外源物质的聚合体,生物膜能够提供保护,增强对外界环境的抵抗,抵御抗生素和消毒剂的攻击。
2 流行病学
该病的传染源主要是感染的鸡只,家禽本身是主要的传染源,尤其是在养殖环境中,致病性大肠杆菌通常存在于感染动物的肠道内。粪便污染的饲料、水源和环境也是传播的潜在源头。
鸡只通过摄入受污染的食物或水源感染大肠杆菌,特别是通过接触感染者的粪便。该病的易感动物很多,鸡是最常见的宿主,易感染各种生态型的大肠杆菌,此外,火鸡、鸭、鹅等也对该病具有易感性,尽管相对少见,它们也可以感染和传播大肠杆菌。猪、牛等其他家畜也是大肠杆菌的宿主,可以通过共用饲料或水源传播感染。
鸡大肠杆菌病一年四季均可以感染发病,当气温骤变和环境潮湿时有助于细菌的生存与传播,这会增加感染的风险,所以在冬春季节的发病率会有所升高。该病还常会与新城疫以及慢性呼吸道病发生混合感染
[4]。
3 临床症状
蛋雏鸡的临床症状主要有4种,分别是急性败血症型、脐炎型、卵黄性腹膜炎型和呼吸道型。
3.1 急性败血症型
本型主要是危害4月龄以内鹅蛋鸡,病鸡表现为腹泻,排出黄色、灰色或绿色的稀便。由于腹泻导致的液体流失,鸡可能表现出脱水的迹象,羽毛蓬松。感染的鸡只通常会出现食欲下降的情况,不愿进食,病鸡还会表现出呼吸急促和喘息。
3.2 脐炎型
病鸡精神萎靡,不愿活动,喜欢扎堆,病鸡脐部出现炎性病变,脐孔周围出现红肿和脐孔闭合不全的情况,对脐孔进行挤压,可见有大量炎性渗出物,并释放出恶臭气味。
3.3 卵黄性腹膜炎型
病鸡腹部出现膨大和下垂,触摸时会有波动感,精神沉郁,食欲下降。鸡冠呈暗红或红色,发病急,病程短,具有较高的死亡率。
3.4 呼吸道型
本型主要发生于5~12周龄的蛋雏鸡,主要表现为呼吸道症状,咳嗽和气喘,还常可见支原体病和传染性支气管炎等疾病共同发生。
4 病理变化
4.1 急性败血症型
肝脏肿大,肝脏可能增大并出现黄染,质地变软,在肝脏表面有灰白色的坏死灶,呈点状,脾脏增大,并可能变得颜色暗沉,质地变软;心脏肿大出血,在心包内有大量积液,呈淡黄色,肺脏有水肿和出血,肾脏也出现明显肿胀;肠道呈现出弥漫性的充血和出血,导致肠管呈黑色。
4.2 脐炎型
病死鸡肝脏呈现肿胀,质脆易碎,颜色呈暗红色,有时还会呈现出土黄色,肝脏表面有点状出血。肠道胀气,肠黏膜有充血和出血。
4.3 卵黄性腹膜炎型
主要病变在腹腔,可见腹腔内有卵黄液,导致腹腔内的器官被卵黄液黄染,从而形成纤维素膜,还会导致多个组织器官之间的黏连。
4.4 呼吸道型
发生本型的病鸡剖检后可见在气囊腔内有大量干酪样渗出物,呈白色,有时还可见病鸡的肺脏出现水肿和出血。
5 诊断方法
该病通过对临床症状和病理变化的观察很难确诊,需要通过实验室技术才能够确诊。在实验室,通过病原的分离培养、血清学试验和分子生物学试验可以确诊该病。
5.1 病原体培养
采集症状明显的雏鸡的新鲜粪便,通常需要在不同时间段取样以获得更准确的数据。如果有死亡病例,需采集肠道、肝脏、脾脏等相关内脏的组织样本,用于细菌培养和病理分析。将分离病原接种于适当的培养基,常见的有麦康凯琼脂或普通营养琼脂,以适合大肠杆菌的生长,置于37 ℃条件下培养18~24 h,在培养基上观察大肠杆菌的生长特征,通常在普通营养琼脂上生长出乳黄色或无色光泽的菌落,表面光滑。在麦康凯琼脂上生长出的菌落呈玫瑰红色的椭圆形菌落,表面光滑
[5]。
5.2 分子生物学检测
在分子生物学技术中,最常用的是聚合酶链反应(PCR),从分离的大肠杆菌中提取DNA,采用特定的引物对其进行PCR扩增,使用凝胶电泳技术分析扩增产物,以确认目标基因的存在。使用PCR技术还可以快速识别致病性大肠杆菌的特定基因,如O157∶H7等。
5.3 血清学检测
在血清学检测中,最常用且结果最可靠的是酶联免疫吸附试验(ELISA),通过检测鸡血清中的抗体水平,可以判断鸡群对大肠杆菌的免疫反应,这对了解鸡群免疫状态和感染史方面非常重要。
6 防治措施
6.1 预防措施
在日常养殖中,要给鸡群提供营养均衡的饲料,确保饲料富含必要的营养物质,以增强雏鸡的免疫力,尤其是在饲料中应包含足够的蛋白质、维生素以及各种矿物质,粗蛋白的含量应保持在18%~20%。将饲料保存在干燥、阴凉、通风良好的仓库中,避免潮湿引起霉变,尤其是在春夏季节气候潮湿多雨,更容易发生饲料霉变,此时可以在饲料中添加一些脱霉剂,以减少或避免鸡采食霉变饲料。确保水源清洁、无污染,定期检测水质,每天对饮水器进行清洗,定期使用消毒剂对其进行消毒。
定期对鸡舍进行清扫和消毒,减少病原体的存活和传播。每天清扫鸡舍,清除粪便、饲料残渣和其他垃圾,防止病原体滋生,粪便应采取堆肥、填埋或无害化处理,在更换鸡群和发生疫情后,建议每天进行1次全面消毒,以减少环境中的病原,达到有效的预防效果。使用有效的消毒剂,如氯制剂、过氧化氢、碘类消毒剂等,按照说明书稀释和喷洒,并注意避免对鸡群产生刺激,尤其是要注意避免直接对着鸡群的面部进行喷洒,这样容易导致鸡群呼吸进消毒液,对呼吸道产生刺激,消毒时可采用喷雾、浸泡及热水消毒等方法,确保所有设施和环境都消毒到位。对进入养殖区的人员、车辆以及其他器具等也需要进行严格的消毒,对人员消毒采用喷雾的方式或者用紫外线灯消毒,然后更换已经消毒后的衣物,才可以进入。对要进入养殖区的车辆需要通过入口的消毒池对车轮胎进行消毒,然后应用消毒液喷雾的方式对车身以及驾驶室进行消毒,彻底消毒后才可以进入。对器具等可以通过浸泡、熏蒸或者紫外线灯照射的方式进行消毒,根据不同的器具选择消毒方式。
利用窗户、通风孔等自然通风方式,保持室内空气流通,减少病原体浓度,在密闭环境中使用风扇等机械通风设备,以增强空气流动。这样可以将舍内的硫化氢、二氧化碳以及氨气等及时排出,避免对鸡群造成危害。鸡群对环境变化较为敏感,要严格把控鸡舍内的温度,冬季通过安装取暖设备等方法做好保暖措施,尤其是雏鸡对温度敏感,避免因低温而出现扎堆情况,夏季通过安装水帘、加强通风等方式做好防暑降温的措施,防止鸡群出现中暑情况。鸡舍内的湿度应保持在55%~65%为宜,湿度过高容易导致霉菌等有害微生物的滋生,湿度过低又会导致鸡群出现呼吸道黏膜干燥,增加呼吸道疾病的发病率。通常保持鸡舍温度在25~30 ℃,根据雏鸡的生长阶段适时调节。湿度保持在40%~70%。光照时间和强度也要保持相对稳定,避免突然改变光照制度,影响鸡的生物钟和生长发育。
在养殖中,需要合理控制鸡群的饲养密度,依据鸡的品种、日龄和生长阶段,科学规划饲养密度,以减少应激反应,降低感染风险,通常1~2周龄的雏鸡饲养密度应控制在30~40 m2/只;当鸡群达到3~4周龄时,饲养密度应控制在20~30 m2/只。当鸡群密度过大时,雏鸡之间互相拥挤,导致其应激和死亡,还容易引发啄癖等问题,降低鸡群免疫力,为大肠杆菌等病菌的入侵创造条件。
转群和免疫是鸡群饲养过程中最常见容易引发应激的行为。转群要选择在鸡群健康的时段进行,转群前要提前将新鸡舍准备好,确保新鸡舍内的温度和湿度等与原鸡舍接近,转群前3~5 d,可通过在饲料或饮水中添加适量的维生素C、微量元素等物质来减少应激。转群时,避免暴力抓鸡,动作轻柔,避免鸡群出现应激反应。鸡群需要实施科学的免疫接种计划,可以有效预防继发大肠杆菌病的病毒性疾病。免疫接种前,同样需要保持鸡群的健康,然后进行疫苗接种,避免因接种不当导致鸡群应激或免疫失败,滴鼻点眼免疫时,要确保疫苗准确滴入鸡的眼睛和鼻腔内,避免疫苗接种剂量不足。采取肌肉注射的方式接种时,要注意针头和注射部位的消毒,防止感染。免疫接种最好选择在夜间,可以减少应激。
6.2 治疗措施
在养殖场内一旦发生该病,要及时对患病或出现症状的鸡进行隔离,防止病菌传播,然后使用合适的抗生素进行治疗,常用的抗生素包括氟喹诺酮、青霉素、阿莫西林等。应依据细菌的抗生素敏感性测试结果,合理选用抗生素,避免滥用。当前应用较多的方法是使用中草药治疗该病,有研究
[6]通过应用4种中草药组方来治疗该病,效果优于西药组,应用赤芍和黄柏进行研究,采用不同的比例进行试验,其中赤芍和黄柏以6∶1的比例添加后效果最佳,不仅可以达到100%的保护率,鸡的增质量效果最佳;其次是按照4∶5的比例添加后也可以达到100%的保护率,但增质量效果略低于6∶1添加组。还有按照2∶1和1∶2的比例添加,均有一定的死亡率,但效果优于抗生素治疗组。从五味子中提取出的醇甲具有抗鸡大肠杆菌病的作用
[7],通过在各组中添加50、100、200 mg/kg醇甲,可以提升病鸡的体质量,降低脾指数,还可以显著提升血液中的IgM和IgG的水平。黄芪多糖也可以用于治疗雏鸡大肠杆菌病
[8],尤其是在配合抗生素进行治疗时,效果更佳。黄芩、丹皮、地榆、秦皮、赤芍、黄连等也对大肠杆菌具有抑菌效果
[9-10],应用还可以提升机体的免疫力,还可以用板蓝根微粉来治疗雏鸡大肠杆菌病
[11],将板蓝根制成超微粉剂后,其中告依春的含量可以达到1.681 mg/g,高于普通粉剂,用于治疗时,其抑菌环的大小也要大于普通粉剂,可以达到16 mm,应用于大肠杆菌病的治疗时,有效率和治愈率分别可以达到90.00%和83.33%,高于普通粉剂的73.33%和70.00%。因此,用于治疗大肠杆菌病时,使用板蓝根超微粉具有更好的效果。治疗大肠杆菌病还可以应用混合益生菌制剂,效果良好
[12],在饲料中添加植物乳杆菌ZN-3、丁酸梭菌HYCB以及鼠李糖乳杆菌QC组成的混合制剂,能够对宿主的免疫反应起到调节作用,还可以对大肠杆菌病起到治疗效果。在进行大肠杆菌病的防治中,甚至可以应用大肠杆菌噬菌体BP16,具有非常好的防治作用
[13]。噬菌体已经用于细菌性疾病的靶向治疗,但在治疗时,其治疗剂量对治疗效果非常重要,研究
[13]结果显示,应用1.5×10
9 PFU的剂量对雏鸡的保护率达到100%,而且针对1.5×10
8 CFU攻毒时的治疗剂量应为1.5×10
9 PFU的噬菌体,这样治疗效果最佳。
7 结语
雏鸡发生大肠杆菌病后会导致其生长发育受阻,病鸡死亡,造成非常严重的经济损失,在养殖场一旦发现该病,要及时隔离诊断,确诊后要采取相应的药物进行治疗,可以用西药、中草药、益生菌以及噬菌体等,均可以取得良好的效果。同时要注意在养殖中防控该病的发生。