贵阳地区奶牛繁殖障碍疾病病原血清学调查研究

Serological investigation of pathogens causing reproductive disorders in dairy cows in Guiyang area

摘要

[目的]为调查贵阳地区奶牛6种繁殖障碍疾病相关病原的流行情况。[方法]采集2023年贵阳市清镇市、修文县、开阳县5个奶牛场500份奶牛血清样本，采用虎红凝集试验、皮内变态反应和ELISA试验对奶牛6种繁殖障碍疾病病原抗体进行检测和分析。[结果]500份样本中，6种病原抗体阳性率为46.8%，抗体阳性率由高到低分别是牛病毒性腹泻病毒阳性率为31.6%、弓形虫阳性率为23.0%、牛鼻气管炎病毒阳性率为19.6%、牛白血病病毒阳性率为7.2%、牛结核分枝杆菌阳性率为0.4%，未检测到布鲁氏杆菌。混合感染抗体阳性率中，2种病原混合感染抗体阳性率最高为16.6%，其中牛病毒性腹泻病毒和弓形虫混合感染的阳性率最高为6.4%;3种病原混合感染阳性率为7.0%;4种病原混合感染阳性率为1.4%。[结论]贵阳奶牛养殖地区均出现不同繁殖障碍相关病原感染的情况，主要以混合感染为主。在奶牛养殖过程中，要加强对以上病原的检测和净化，并采取相应的防控措施。

关键词

奶牛 / 繁殖障碍疾病 / 血清学调查 / 抗体 / 阳性率

Key words

dairy cow / reproductive disorders / serological investigation / antibodies / positive rate

奶牛繁殖障碍疾病是指母牛不能正常发情、受孕以及怀孕后发生早产、流产、难产、产死胎、产木乃伊胎、产畸形胎等^[1]，是严重影响奶牛产仔、产奶的重要疾病因素。引起奶牛繁殖障碍的因素有非传染性因素和传染性因素^[2]。非传染性因素包括营养缺乏（维生物、蛋白质、日粮能量、矿物质元素等）、饲养管理（泌乳、分娩后卵巢恢复、子宫复旧迟缓、饲料发霉、应激等）^[3]。传染性因素包括细菌性疾病（布鲁氏菌病、结核病、牛大肠杆菌病、牛沙门氏菌病、牛李氏杆菌病、牛链球菌病、牛生殖道弯曲杆菌病等），病毒性疾病（牛病毒性腹泻病、牛传染性鼻气管炎、牛地方流行性白血病、牛流行热等），寄生虫病（日本血吸虫病、弓形虫病、东毕吸虫病、毛滴虫病、牛无浆体病等），其他传染病（牛支原体、牛衣原体病、牛钩端螺旋体病）^[4]。牛布鲁氏菌病、牛结核病、牛病毒性腹泻病、牛传染性鼻气管炎、牛地方流行性白血病和弓形虫病是奶牛场常见的引起奶牛繁殖障碍的疾病，严重影响奶牛产业发展、奶业安全和社会稳定。

近年来，贵阳市大力发展奶牛产业，从国外和省外引进品种优质奶牛，贵阳市奶牛主要集中在清镇市、修文县和开阳县3个地区共5个奶牛养殖场，为了解贵阳地区奶牛繁殖障碍疾病的感染情况，采用布鲁氏菌凝集试验、牛结核分枝杆菌皮内变态反应和ELISA试验，对牛结核分枝杆菌、布鲁氏菌、牛病毒性腹泻病毒、牛鼻气管炎病毒、弓形虫、牛白血病病毒感染情况进行检测，以期为贵阳地区繁殖障碍性疾病的防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原/阳性血清、布鲁氏菌试管凝集试验抗原/阳性血清购自青岛立见生物科技有限公司；提纯结核菌素购自哈药集团生物疫苗有限公司；牛白血病竞争ELISA抗体检测试剂盒、牛病毒性腹泻ELISA抗体检测试剂盒、牛鼻气管炎竞争ELISA（gB）抗体检测试剂盒购自西班牙英吉纳公司；弓形虫间接ELISA抗体检测试剂盒购自美国kernel公司。

1.2 主要仪器设备

酶标仪（BioTek ELX808），美国伯腾仪器有限公司；高速冷冻离心机（1730R GeneSpeed），基因有限公司；恒温培养箱（DHP-240），无锡玛瑞特科技有限公司。

1.3 血清采集

奶牛场未免疫牛结核分枝杆菌、布鲁氏菌、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）、弓形虫、牛白血病病毒（BLV）疫苗。血液样本由奶牛场技术人员和贵阳市动物疫病预防控制中心技术人员采集。采用真空采血管在奶牛尾根静脉采集5 mL左右的血液，在常温下凝固待血清自然析出后送贵阳市动物疫病预防控制中心兽医实验室，低速离心3 500 r/min，离心5 min，取上层血清在2 mL离心管中放置在-20 ℃冰箱中备用待检。开展牛结核分枝杆菌皮内变态反应时，同步采集奶牛血清样本，2023年共采集血清样本500份，其中，清镇100份，修文县200份、开阳县200份。

1.4 检测方法

奶牛结核病检测按照《动物结核病诊断技术》（GB/T 18645—2020）牛结核分枝杆菌皮内变态反应操作要求进行颈部注射提纯结核菌素，参照国标标准判断结果；布鲁氏菌虎红平板凝集试验、布鲁氏菌试管凝集试验、牛白血病病毒竞争ELISA抗体检测、牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测、牛鼻气管炎病毒竞争ELISA（gB）抗体检测、弓形虫间接ELISA抗体检测严格按照检测试剂说明书进行操作和结果判断。

2 结果与分析

2.1 贵阳地区奶牛6种繁殖障碍相关病原抗体检测

采用牛结核分枝杆菌皮内变态反应、虎红凝集试验和ELISA试验对牛结核分枝杆菌、布鲁氏菌、牛病毒性腹泻病毒、牛鼻气管炎病毒、奶牛弓形虫、牛白血病病毒检测并进行试验结果分析，结果见表1。

由表1可知，检测样本中未检测到布鲁氏菌抗体。奶牛结核病平均阳性率为0.4%，2份阳性样本来自清镇市某奶牛场，其余奶牛养殖场均未检测到阳性样本。

牛病毒性腹泻病毒平均抗体阳性率为31.6%，其中清镇市抗体阳性率最高，为43.0%，开阳县抗体阳性率最低，为24.0%。牛鼻气管炎病毒平均抗体阳性率为19.6%，开阳县和清镇市抗体阳性率最高，均为21.0%，修文县抗体阳性率最低，为17.5%。弓形虫平均抗体阳性率为23.0%，清镇市抗体阳性率最高，为32.0%，修文县抗体阳性率最低，为19.5%。牛白血病病毒平均抗体阳性率为7.2%，清镇市抗体阳性率最高，为10.0%，修文县抗体阳性率最低，为4.5%。

2.2 贵阳地区奶牛6种繁殖障碍相关病原感染情况

在采集的500份检测样本中，6种病原抗体阳性率为46.8%。其中，单一病原抗体阳性率为21.8%，牛病毒性腹泻病毒感染阳性率最高，为12.4%，布鲁氏菌、牛分枝杆菌、牛白血病病毒单一病原感染阳性率为0，弓形虫和牛鼻气管炎病毒病原感染阳性率分别为5.8%、3.6%；2种病原混合感染阳性率为16.6%，其中牛病毒性腹泻病毒和弓形虫混合感染的阳性率最高，为6.40%；3种病原混合感染阳性率为7.0%，其中牛病毒性腹泻病毒、牛鼻气管炎病毒和弓形虫混合感染的阳性率最高，为4.2%，牛病毒性腹泻病毒、牛鼻气管炎病毒、牛白血病病毒混合感染的阳性率为1.0%，牛鼻气管炎病毒、牛白血病病毒和弓形虫混合感染的阳性率为1.8%；4种病原混合感染阳性率为1.4%，为牛病毒性腹泻病毒、牛鼻气管炎病毒、牛白血病病毒和弓形虫混合感染（表2）。

3 讨论

牛布鲁氏菌病是布鲁氏菌感染引起妊娠母牛流产、公牛睾丸炎和附睾炎的细菌性人畜共患病传染病^[5-6]，我国将其列为二类传染病。牛结核病是结核分枝杆菌感染引起牛乳房结节、生殖器结节的慢性、消耗性人畜共患病^[7]，我国将其列为二类传染病。牛传染性鼻气管炎（IBR）是牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）感染引起生殖道感染、怀孕母牛流产、产死胎等症状的接触性传染病^[8]，我国将其列为二类传染病。牛病毒性腹泻（BVD）是牛病毒性腹泻病毒（BVDV）感染引起妊娠母牛发生流产、早产、产死胎、腹泻、生殖障碍等症状的接触性传染病^[9]，我国将其列为三类传染病。牛地方流行性白血病（BL）是牛白血病病毒（BLV）感染引起怀孕母牛流产、难产、屡配不孕、子宫肌瘤等症状的慢性、进行性、接触性传染病^[10]，我国将其列为三类传染病。弓形虫病是刚地弓形虫感染引起奶牛流产、体温升高、便血、繁殖障碍等症状的人畜共患病^[11]，我国将其列为三类传染病。

本试验采集2023年贵阳市清镇市、修文县、开阳县5个奶牛场500份奶牛血清样本，采用牛结核分枝杆菌皮内变态反应、虎红凝集试验和ELISA试验对牛结核分枝杆菌、布鲁氏菌、牛病毒性腹泻病毒、牛鼻气管炎病毒、弓形虫、牛白血病病毒进行血清学调查。奶牛场检测的样本中未检测到布鲁氏菌抗体阳性样本，奶牛结核病阳性率为0.4%，牛病毒性腹泻病毒抗体阳性率为31.6%，牛鼻气管炎病毒抗体阳性率为19.6%，弓形虫抗体阳性率为23.0%，牛白血病病毒抗体阳性率为7.2%。对混合感染情况分析，2种病原混合感染阳性率为16.6%，3种病原混合感染阳性率为7.0%，4种病原混合感染阳性率为1.4%。

本研究表明，贵阳地区引起奶牛繁殖障碍性疾病的病原主要以混合感染为主，其中牛病毒性腹泻病毒、弓形虫和牛鼻气管炎病毒感染比例最高，这与郭亚男等^[5]研究结果一致。结合临床怀孕母牛屡配不孕、流产、死胎等情况，奶牛场存在较高繁殖障碍疾病发病率的情况，因此繁殖障碍疾病的防控至关重要，但是因本试验仅开展了血清抗体的检测，还不能完全确诊奶牛发生繁殖障碍的病因，后续将围绕病原学展开深入研究。

牛病毒性腹泻和牛传染性鼻气管炎都是免疫抑制病，奶牛感染牛病毒性腹泻病毒后能够诱导免疫抑制，引起持续感染和免疫反应失调^[12]。牛传染性鼻气管炎病毒主要为潜伏感染，感染牛长期持续排毒^[13]，造成健康牛大面积感染。奶牛弓形虫可水平传播和垂直传播，多呈隐性感染，容易在群体中扩散造成群体感染。

在以上繁殖障碍性疾病的防治过程中，牛病毒性腹泻和牛传染性鼻气管炎已有商品化疫苗可以进行免疫，奶牛结核病和布鲁氏菌病的防控主要还是采取检疫、扑杀、再检疫的防控措施，逐渐进行净化消除。弓形虫病的治疗可以选择大环内酯类抗生素和磺胺类药物进行治疗，但是要注意奶牛产奶的弃奶期和休药期。更重要的是奶牛场要注意提高生物安全防控水平，严格制定消毒消杀制度，定期开展圈舍空栏消毒和带畜消毒，加强引种隔离检疫，定期开展疫病感染情况调查，发现阳性及时隔离，提高养殖饲养管理水平，注意饲料的合理搭配。科学制定免疫程序，除了做好口蹄疫等强制免疫病种外，还要根据养殖场疫病流行情况及时调整免疫病种和免疫时间，积极开展动物疫病净化和无疫小区创建。关注饲养人员人畜共患病感染情况。

参考文献

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基金资助

贵州省第八批千层次创新型人才培养项目(筑科合同-GCC-[2024]022)

贵州省科技厅项目(（黔科合支撑）[2016]2620号)

贵州省农业委员会项目

贵阳市人才创新创业资助项目(筑人才办合同字[2019]第36号)