环介导等温扩增技术在牛病毒性腹泻检测中的应用

周娴; 陈文钦; 王雯熙; 孙智武; 张苗苗; 郭妮妮; 宋先荣; 吴修竹

doi:10.13300/j.cnki.cn42-1648/s.2025.05.011

养殖与饲料 ›› 2025, Vol. 24 ›› Issue (05) : 41 -46. DOI: 10.13300/j.cnki.cn42-1648/s.2025.05.011

疾病防控

环介导等温扩增技术在牛病毒性腹泻检测中的应用

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Application of loop mediated isothermal amplification in the detection of bovine viral diarrhea

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摘要

目的基于环介导等温扩增（loop mediated isothermal amplification,LAMP）技术，研究1种快速、灵敏检测牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus, BVDV）检测方法，为牛病毒性腹泻的快速诊治提供参考。方法参考GenBank上BVDV序列，依据BVDV的结构蛋白5'-UTR保守序列设计出多组引物探针，从中优选出1组扩增效果最佳的引物探针，经过优化反应体系和退火温度，建立BVDV的环介导等温扩增技术（LAMP）检测方法。随后对该方法的敏感性、特异性进行了评估，并应用该检测方法进行临床样品检测。结果所建立的LAMP方法展现出高度特异性，仅对BVDV产生扩增信号，与牛常见病原（如口蹄疫、沙门氏菌等）无交叉反应；通过梯度稀释重组质粒验证，其检测灵敏度为10²copies/µL，较常规PCR提升10倍；临床样本检测结果与PCR法完全一致（符合率100%）。结论本研究建立的BVDV LAMP检测方法敏感性高、特异性强，适用于牛病毒性腹泻病的临床诊治。