1例山羊魏氏梭菌病的调查与诊断

Investigation and diagnosis of one Clostridium welchii disease in goat

摘要

[目的]对云南省普洱市某山羊养殖户急性死亡的山羊进行病因调查和有效诊治，以期为山羊饲养中的疫病诊断提供参考。[方法]通过对116只羊（12月龄以上成年羊40只，6～9月龄小羊76只）进行紧急流行病学调查、现场调查、病理剖检和实验室检测，并根据结果进行综合分析和诊断。[结果]病理剖检显示，病羊肺脏、肾脏和胃肠等器官均有出血，心脏呈现心衰样变；核酸检测结果显示，5头羊样品均为魏氏梭菌核酸阳性。[结论]此次山羊发病死亡由魏氏梭菌引起，野外采食感染可能性很大。羊群在未接种三联四防疫苗的背景下因饲养管理水平低，气温降低，导致其免疫力下降，造成发病死亡。应做好饲养管理和免疫，减少雨天放牧。发现异常情况及时报告，及时隔离病羊，才能有效控制疫病的传播。

关键词

魏氏梭菌 / 山羊 / 现场调查 / 核酸检测 / 病理剖检

Key words

Clostridium welchii / goats / on-site investigation / testing nucleic acid / pathological autopsy

魏氏梭菌又称为产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens），是1种革兰氏阳性杆菌，广泛存在于土壤、污水、人和动物的排泄物以及肠道等环境中，可感染人、猪、牛、羊等动物^[1]。根据魏氏梭菌分泌的6种主要毒素（α、β、ε、ι、CPE和NetB），可将其分为A~G 7种血清型^[2]。该菌引起的多种疾病是由1种或多种毒素共同作用的结果，受到产气荚膜梭菌侵袭的动物往往发病迅速，顷刻间出现休克乃至死亡，如不加以重视，还会给周边养殖户带来传播风险，从而造成经济损失^[3]。

羊魏氏梭菌病通常在季节变换、气温骤降时易发^[4]。急性病例发病突然，死亡率高，病羊往往出现抽搐、角弓反张等神经症状，同时口、鼻腔中还有泡沫状的液体流出，伴有磨牙、眼球转动等，一般情况下会在数小时内死亡。稍慢性的病例可见卧地不起、气喘、运动失调、精神萎靡不振、腹部鼓气膨胀；有的在临死之前可能会出现严重腹泻，粪便呈黑褐色，最终在昏迷中心脏衰竭死亡^[5]。

云南省普洱市适宜的气候和丰富的野生牧草资源为山羊养殖业提供了良好的自然条件。近年来，随着羊肉及其相关衍生产品的需求量稳步增长和政策的大力扶持，普洱市羊养殖业的市场规模不断扩大，山羊调运、交易日趋频繁。在此背景下，羊病防控的复杂性也不断增加，给当地的防疫工作带来了挑战。本文分析了1例因野外放牧感染魏氏梭菌的病例，旨在为亚热带地区山羊野外放牧或林下养殖模式在疫病防控及提升养殖管理水平方面提供参考。

1 材料与方法

1.1 发病情况

2024年9月4日早上，户主在圈舍周围1 km左右的改板山中放羊时发现圈舍内死亡2只成年羊，症状为口鼻流粉白色泡沫、肛门出血。此后几日陆续有羊发病死亡，病程大多短促，表现为无症状急性死亡，如晚间归圈时正常，次日早上发现其死于圈内；病程长的表现为高热、食欲减退、侧卧在地、痉挛。首次发病后，户主自行使用头孢霉素、小柴胡干预治疗，其中2只成年羊经药物治疗后恢复。截至2024年9月20日，共发病12只，死亡10只，其中2只羊为9月龄，其余均为1岁以上成年羊。技术人员随即对濒死病羊及死亡3 h左右的病羊尸体进行剖检观察，采取样品送检。

1.2 主要设备和试剂

荧光PCR仪（ABI Q7）购于ThermoFisher Scientific，全自动核酸提取仪（NP968-S）购于西安天隆科技有限公司，医用低温保存箱（DW-40W380J）购于青岛海尔生物医疗有限公司，高通量组织研磨仪（TL2020）购于北京鼎昊源科技有限公司，A2生物安全柜购于上海力申科学仪器有限公司，魏氏梭菌荧光PCR检测试剂盒（批号：24082801）、小反刍兽疫荧光PCR检测试剂盒（批号：24051101）、口蹄疫荧光PCR检测试剂盒（批号：24060701）、支原体荧光PCR检测试剂盒（批号：24050501）、巴氏杆菌荧光PCR检测试剂盒（批号：24072301）、链球菌荧光PCR检测试剂盒（批号：24091901）均购于广州维伯鑫生物科技有限公司。

2 结果与分析

2.1 流行病学调查

1）养殖情况。该养殖户位于思茅区莲花村上那么田小组的山林中，共饲养116只山羊，以放养为主，圈养为辅；白天周边山林放养，下午将羊赶回场内，共饲一圈。周围林木主要以思茅松、杂木和甜龙竹为主。养殖地环境独立，距离村寨约4 km，地理隔离条件较好，且4 km范围内无其他畜禽养殖场（户），放牧区域与其他羊群无交叉。

2）引种情况。2022年8月，户主从邻近的宁洱县同心镇购入60只山羊自繁自养，2024年4月又从宁洱县城郊一养殖户处购入1只公羊，隔离观察30 d无发病情况后并群饲养。2024年9月4日，羊群首次发病，发病前存栏羊116只，其中公羊40只，母羊76只。

3）免疫情况。购入前羊群的免疫背景不详，购入后免疫口蹄疫、小反刍疫苗，未免疫羊三联四防疫苗。

4）人员、车辆、饲草料情况。饲养人员仅户主及家人，在家和羊圈舍间来回活动，未到过其他羊场或交易市场，期间未购入生羊肉、生牛肉；发病前后没有其他人员、车辆到过圈舍及户主家中，未接触过患病或疑似病例的动物。偶尔辅助喂食玉米面等精饲料，发病后停喂。精饲料购自市场，经观察玉米面无肉眼可见霉变或其他腐质变质等变化。

2.2 现场调查结果

1）临床症状。病羊死亡前无明显临床症状，前1 d正常采食，第2天早上死亡，部分病羊精神萎靡不振、离群独居，步态不稳，体温41 ℃。死亡羊只临床表现为角弓反张、腹部鼓胀，伴随鼻孔流出粉白色泡沫（图1、图2）；在口腔黏膜、蹄部和被毛下皮肤未观察到水疱性疹，眼结膜处未发现分泌物。

2）病理剖检变化。解剖发病死亡3 h左右的山羊尸体，尸体外观状态良好，腹部鼓气膨大明显，血液呈现暗红色。肺部呈粉白色，表面有明显出血斑，肺内充满泡沫，胸腔有积液（图3）；胆囊充盈肿大（图4）；肝、脾无肉眼可见变化；心肌薄、软，呈现心衰样变（图5）；肾脏出血，变软（图6）；胃表面有出血斑，小肠出血（图7）；膀胱充满稀薄血样液体（图8）。

2.3 实验室检测

采集2头病死羊心肝脾肺肾组织和口鼻肛棉拭子，3头发病羊口眼鼻棉拭子和全血，共5头羊样品送至普洱市动物疫病预防控制中心兽医实验室。利用荧光PCR方法进行支原体、巴氏杆菌、魏氏梭菌、链球菌、口蹄疫病毒及小反刍兽疫病毒核酸检测。检测结果显示：5头羊样品中均检出魏氏梭菌核酸阳性（除病死羊组织样品未检出外，其余样品均为魏氏梭菌核酸阳性），支原体、巴氏杆菌、链球菌、口蹄疫病毒以及小反刍兽疫病毒核酸检测均为阴性。魏氏梭菌核酸扩增图如图9所示，魏氏梭菌qPCR反应程序及体系见表1。

2.4 诊断结果

根据现场流行病学调查、临床症状、组织病理变化、实验室检测结果分析，判定此次发病是由魏氏梭菌感染引起的羊猝狙，因饲养管理水平不佳，连绵阴雨天气造成的阴冷环境使羊群应激、抵抗力下降，从而导致发病。

2.5 治疗干预

发病羊隔离饲养，对羊舍、用具及周围环境等进行全面消杀，禁止外来人员、车辆、畜禽等进入羊养殖区域，每天早上放羊和下午收羊回圈时仔细观察羊群，发现异常羊只立即隔离。饲喂小麦和玉米等精料，补充营养，提高羊群抵抗力；羊舍做好防寒保暖。治疗采用土霉素、替米考星等抗菌药液肌肉注射，用药剂量按照说明书进行；口服乳酶生，调节魏氏梭菌引起的胃肠道不适症状，2片/次，2次/d，减少肠内产气，促进消化；口服补液盐，防止脱水情况出现。对病羊尸体、接触物、排泄物等采用焚烧、深埋等无害化处理，防止因病羊尸体处置不当而导致疫情进一步蔓延。

2.6 预后转归

本病例累计发病羊12只，发病率为10.34%；死亡10只，病死率为83.3%。经过及时诊断、干预和治疗，病情得到了有效控制，未出现扩散。

3 讨论

本案例中羊群以放养为主要的饲养模式，一般是清晨出圈舍，傍晚返回。一方面长时间接触野外环境，仅少数时间喂食玉米面等精料，导致部分羊只营养不足、体质差、体型较为消瘦；另一方面，羊群发病期正值普洱市阴雨天气，降水量增多、体感温度下降，潮湿环境有利于包括魏氏梭菌在内的各类致病菌的繁殖。综合现场流行病学调查、临床症状、组织剖检、病理变化、实验室检测结果分析：该病例符合魏氏梭菌感染特征。因此，判定本病例中引起山羊死亡的病原是魏氏梭菌，羊群在野外采食了带有魏氏梭菌的草料，再加上连续的降雨天气造成的阴冷环境易使羊群应激、抵抗力下降，从而导致发病。

魏氏梭菌（产气荚膜梭菌）在自然界中分布广泛，其芽孢在土壤或污染的饮水中十分常见，家畜常因采食被该菌芽孢污染的牧草和水源而发病。该病没有明显的季节流行性，温度骤变、季节更替时多发。魏氏梭菌的致病性在于其毒力基因编码产生的毒素，各型梭菌产生的各类毒素所导致的疫病也不同。对羊群致病的血清型主要是B型、C型和D型3种^[6]，在临床上分别引起羊痢疾、羊猝疽以及羊肠毒血症^[7]。由A型魏氏梭菌引发的疫病被称为黄羊病，该病症在临床上较为罕见，其临床症状隐匿且缺乏特异性，主要表现为贫血、黄疸和血红蛋白尿等。在欧洲、澳洲等地区已有零星的病例报道，但总体发病率较低，多为散发病例^[8]。

B型魏氏梭菌引起的感染通常导致羊痢疾，在牛和马中比较罕见。其产生的α、β、ε毒素会引起肠道病变和肠毒血症，严重的导致死亡^[9]。羔羊痢疾的特征是坏死性出血性肠炎，临床症状为精神萎靡、食欲减退、高热、腹泻等，粪便呈黄绿或灰白色且有气泡。胃壁多处腐烂且有出血带，皱胃出现凝乳块^[10]。

C型魏氏梭菌可引起多种哺乳动物和人类的坏死性肠炎和肠毒血症，尤其在新生儿较为常见，因为初乳中可能含有胰蛋白酶抑制剂，使新生儿更容易受到β毒素（CPB）的影响^[11-12]；在动物中可导致神经损伤甚至发生急性猝死。C型魏氏梭菌感染羊引发的疾病被称为羊猝疽，急性发病时没有任何早期症状，很快发生死亡。慢性发病会发生剧烈痉挛，侧卧在地，腹部鼓胀发痛，眼球突出，后惊厥而死。剖检后胸腔、腹腔有积液，胃肠黏膜出血、充血、溃烂，有的出现溃疡灶；肝脏质地硬；肺脏出血带有泡沫，肾脏呈深紫色。

D型魏氏梭菌与绵羊、山羊和牛的肠毒血症和小肠结肠炎有关。肠毒血症多见于牛和羊，山羊感染D型魏氏梭菌会导致其小肠结肠炎，伴有肠毒血症。急性病例往往快速死亡，尸体腐烂迅速；慢性病例特征是胸腔有积液，心包增厚，心包液增多，心外膜有大斑点状出血^[13]。目前的研究认为，该病的主要诱因是突然摄入高度富含可发酵碳水化合物的饲料，饲料中过高的蛋白含量导致胃肠负担过重，加快病原菌繁殖，从而导致发病^[11,14]。

从临床症状和病理变化来看，本案例较为符合C型魏氏梭菌感染山羊引发羊猝疽的特征。通过实验室检测，5只羊的送检样本均检测到魏氏梭菌核酸，但由于条件限制，没有进行魏氏梭菌的实验室分型，期望未来进一步提高本实验室的细菌分型能力，有效对症治疗、预防和控制魏氏梭菌病，减少养殖户的经济损失，保障畜牧业平稳健康发展。

参考文献

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