羊李氏杆菌病的临床症状、诊断方法及防控措施

摘要

李氏杆菌作为第二大食源性致病菌，在自然环境中普遍存在，能够感染60余种动物。羊作为主要易感动物之一，发病后表现为脑炎、子宫炎或败血症，该病不仅阻碍了羊产业的健康发展，也对公共卫生安全造成严重威胁。因此，各养殖场应充分认识该病，推荐使用双抗体夹心ELISA等血清学诊断技术或多重PCR等分子生物学诊断技术进行早期诊断，以便有针对性的用药。日常饲养中，应注重圈舍环境卫生和温湿度的控制，以降低羊李氏杆菌病的发病率，减少经济损失。

关键词

羊 / 李氏杆菌病 / 临床症状 / 诊断方法 / 防控措施

近年来，随着羊产业的蓬勃发展，活羊转运、交易日益频繁，各类传染性疾病呈高发趋势。李氏杆菌作为自然环境中广泛存在的一种病原菌，可侵袭羊只引发脑炎、子宫炎或败血症，严重时可导致羊只死亡。为降低李氏杆菌病对羊产业的危害，应从早期诊断入手，当出现疑似病例时，要根据临床症状进行初步诊断，再配合实验室诊断方法进行确诊，同时根据诊断结果及时用药，以控制病情，提高治愈率。

1 病原学

李氏杆菌是仅次于沙门氏菌的第二大食源性致病菌^[1]，为革兰氏阳性球杆菌，菌体大小约0.5 μm×1.0 μm，无荚膜和芽孢；可分为7个类型，分别是单核细胞增生性李氏杆菌、绵羊李氏杆菌、塞氏李氏杆菌、格氏李氏杆菌、默氏李氏杆菌、英诺克李氏杆菌、威尔斯李氏杆菌^[2]，其中以单核细胞增生性李氏杆菌的致病性最强，感染后常引发羊脑炎型李氏杆菌病。单核细胞增生性李氏杆菌是兼性厌氧菌，可分为13种血清型，分别是3a型、3b型、3c型、4a型、4b型、4c型、4d型、4e型、4ab型、1/2a型、1/2b型、1/2e型、7型，以4b型发病率最高，可占总发病率的50%左右^[3]。该菌在35 ℃条件下活力最强，最适pH值为7~8，当pH值大于9.4或小于5.6时该菌停止生长。该菌对环境的耐受力较强，耐酸、耐碱、耐高盐环境，在干燥环境中存活时间较长，65 ℃条件下可存活30~40 min，紫外线照射下15 min可使病原灭活。氢氧化钠、福尔马林或煤焦油皂溶液能够对李氏杆菌起到良好的杀菌消毒作用，2%氢氧化钠或2%福尔马林作用20 min、10%煤焦油皂溶液作用10 min可有效杀灭该菌。

2 流行病学

2.1 易感动物

目前已知李氏杆菌可感染42种哺乳动物和22种鸟类^[4]，羊是主要易感动物之一，其中绵羊的发病率显著高于山羊。此外，李氏杆菌病还是重要的人畜共患病，严重危害公共卫生安全。

2.2 传染源

患病动物和带菌动物是主要的传染源，其粪便、尿液、精液、乳和分泌物中均含有大量病原，可污染饲养环境、饲料和饮水，特别是在青贮饲料中李氏杆菌的繁殖速度加快，易造成该病的发生，因此李氏杆菌病也可称为“青贮病”。

2.3 传播途径

羊李氏杆菌病的主要传播途径是呼吸道、消化道或经破损皮肤感染，健康羊通过接触被污染的饲料、饮水以及环境而发病。此外，蝇、跳蚤或蜱也是传播该病的重要媒介。

2.4 发病特点

羊李氏杆菌病一年四季均可发病，以寒冷季节高发。该病的发生多呈散发形式，也可呈地方性流行。

3 临床症状

3.1 脑炎型李氏杆菌病

该类型是羊李氏杆菌病最常见的表现形式，患病羊出现精神沉郁，低头垂耳，目光呆滞，结膜炎，鼻腔内有黏性分泌物。部分患病羊呈无目的地乱撞等意识障碍症状，或因舌麻痹出现采食、吞咽或咀嚼障碍。随着病情发展，患病羊瘫痪，无法站立，甚至进入昏迷状态，四肢呈划水状，角弓反张，口吐白沫，常于3~7 d内死亡^[5]。

剖检患病羊，主要病变集中在脑组织，脑膜水肿且血管扩张、充血呈树枝状，大小脑间的脑沟变浅，脑回宽大。切开病变部位，脑组织水肿、湿润，且有灰白色病灶和鲜红色出血点。此外，肝脏肿胀，被膜紧张，颜色淡黄，切开后可见灰白色病灶。

3.2 子宫炎型李氏杆菌病

母羊感染李氏杆菌后可能出现子宫炎症状，表现为产前21 d左右出现流产，胎衣无法和胎儿一同排出，会在子宫内滞留2~3 d，随后自行排出体外，母羊流产后无其他临床症状。

剖检患病羊，可见卵巢黄体退化，输卵管黏膜上皮细胞界限不清，细胞核深染，子宫绒毛上皮坏死，子宫内有脱落的细胞，子宫黏膜浅层的柱状细胞边界不清，细胞质的嗜酸性、嗜碱性均降低，且附有脓性渗出物。若胎儿妊娠前期在子宫内发生早期死亡会受到自溶作用的影响，母羊出现轻微的败血症病变；若胎儿在妊娠后期死亡，不会出现自溶反应，胎儿的肝脏、脾脏和肺脏中有粟粒性坏死灶。

3.3 败血症型李氏杆菌病

患病羊表现为精神沉郁，体温升高，口角流涎，流泪，鼻腔内有黏性分泌物，吞咽速度变缓。该类型多为脑炎型李氏杆菌病患病羊转变而来。

剖检患病羊，脑膜充血，脾脏、肾脏、肝脏以及淋巴结肿大，肝脏切面有粟粒状坏死灶，心外膜出血，肺脏的心叶、尖叶表面有灰红色、灰白色点状坏死灶，切开肺脏的病变区域，有红色的炎性液体流出。

4 诊断方法

4.1 病原学诊断

1）优缺点。该方法可直接检测到病原体，结果直观且准确度高，是羊李氏杆菌病诊断的金标准。但操作较为复杂，耗时较长，对试验环境和人员技术要求较高，适用于实验室条件完备、需要准确诊断的场合，特别是在疫情初期和混合感染等疑难病例诊断中。

2）涂片镜检。无菌采集患病羊的脊髓液、脾脏或肝脏作为病料，用涂抹法或压拉涂片法制成涂片，经革兰氏染色后置于显微镜下观察，可见散在的“V”型栅状排列的革兰氏阳性球杆菌，则可认为是李氏杆菌感染。

3）分离培养。无菌采集患病羊脾脏或肝脏组织，接种在血液琼脂培养基中，37 ℃下培养1~2 d，若培养基表面有针尖大小至米粒大小的露珠状、淡黄色菌落，且菌落旁有明显的β溶血环，将该菌落接种在亚碲酸钾琼脂培养基上，可形成黑色菌落，则认为是李氏杆菌感染。

4）生化试验。将分离培养得到的菌落进行生化试验，若结果为葡萄糖、果糖、水杨酸、鼠李糖、乙酰甲基甲醇、甲基红试验呈阳性，产酸不产气，乳糖、甘露醇试验呈阴性，则认为是李氏杆菌感染。

4.2 血清学诊断

1）优缺点。该方法操作简便，检测速度快，在大规模疫病筛查和流行病学调查中应用广泛，特别是在疫情暴发时可用于快速评估感染范围。但该方法无法区分免疫羊群和自然感染羊群，存在一定的交叉反应，特异性较低。

2）ELISA法。马金锐等^[6]通过构建pET-32a-InlG重组表达载体，诱导表达了InlG重组蛋白，将蛋白纯化后免疫小鼠，制备1D2-1捕获抗体，并建立了单核细胞增生性李氏杆菌的双抗体夹心ELISA方法，该方法最低检出限为10⁶ CFU/mL，且与沙门氏菌、枯草杆菌、大肠杆菌、白色葡萄球菌等病原均不发生反应，特异性和重复性较好^[6]，给该病的诊断提供了新方法。

3）胶体金。当李氏杆菌溶血素蛋白原核表达后可制备单克隆抗体，江玲丽等^[7]利用柠檬酸钠法制备了李氏杆菌溶血素胶体金试纸条，该方法的检测准确率为91.67%，且大大缩短检测时间，提高了检测效率。

4.3 分子生物学诊断

1）优缺点。可用于诊断羊李氏杆菌病的分子生物学方法包括PCR法、多重PCR法、实时/定量PCR法、重组酶聚合酶扩增技术等。该方法特异性强，灵敏度高，可同时检测多种病原体。但设备昂贵，前期投入较大，且对人员技术要求较高，适用于需要高灵敏度和特异性的情况，如病原体分型、溯源等。

2）多重荧光定量PCR。有研究者建立了多重食源性致病菌快速检测方法，对大肠杆菌、沙门氏菌、单核增生性李氏杆菌基因中的保守序列进行特异性引物设计，并加入Taqman探针，建立多重荧光定量PCR反应体系，该方法最低检出限为10⁴ copies/μL，且重复性良好^[8]。

3）重组酶聚合酶扩增技术。王亚磊等^[9]以羊李氏杆菌溶血素基因hly为靶序列设计了基于侧流层析的重组酶聚合酶扩增技术的引物和探针，在37 ℃下反应15 min，可检测出样品中的李氏杆菌，且该方法与其他食源性病原微生物无交叉反应，最低检出限为400 pg。

5 综合防控措施

5.1 预防

预防羊李氏杆菌病首先应从加强饲养管理入手，由于李氏杆菌在环境中广泛存在，应加强羊群的抵抗力，降低李氏杆菌感染的可能性。特别是在寒冷季节来临前，应对圈舍增设保温设施，维持圈舍温度在适宜范围内，1月龄内的羔羊舍温度应维持在20~30 ℃，月龄越小圈舍温度应越高；1月龄后的羊舍温度应维持在20 ℃左右。同时，应保证羊只有足够的活动空间，每只成年羊的活动空间应不小于1 m²。此外，还应定期进行环境消毒，每周至少对圈舍清扫、消毒1次，消毒药品可选择2%氢氧化钠溶液或10%~20%石灰乳。对于临产羊，应在产前1~2 d使用0.1%高锰酸钾溶液对母羊的后躯进行消毒擦拭，以避免分娩时羔羊感染李氏杆菌。

5.2 治疗

当羊只确诊为李氏杆菌病后，应首先进行隔离，并对患病羊圈舍进行彻底消毒，消毒药物可选择3%~5%甲酚皂溶液、2%氢氧化钠溶液等喷洒消毒。治疗时可通过药敏试验确定抗菌药物，以降低病原的耐药性。若不具备进行药敏试验的条件，则可选择复方磺胺甲恶唑或氨苄西林钠，具体给药方案：12%复方磺胺甲恶唑注射液进行肌肉注射，剂量为0.20~0.25 mL/kg，2次/d，连续使用5 d；氨苄西林钠肌肉注射，剂量为10~20 mg/kg，2次/d，连续使用3 d。当患病羊有明显神经症状时，可肌肉注射氯丙嗪，剂量25 mg/只，以减少痉挛、震颤的发生。

6 结语

羊李氏杆菌病的防控是一项系统且关键的工作，不仅关系到羊产业的健康发展，还与公共卫生安全息息相关。通过加强饲养管理、定期消毒等措施积极预防该病，并在出现疑似病例时尽早诊断，积极防控，以保障羊群健康和养殖效益。

参考文献

[1] 鲁爱峰,贾文玉,徐琳娜.羊脑炎型李氏杆菌病的诊断及防治[J].畜禽业,2024,35(4):65-67.

[2] 郝荣进.羊脑炎型李氏杆菌病的诊断与综合防控[J].特种经济动植物,2024,27(9):61-63.

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[4] 陈秋菊.羊李氏杆菌病的流行病学、临床症状和防控措施[J].现代畜牧科技,2019(10):125-126.

[5] 赵凤兰.羊李氏杆菌病的流行病学、诊断与防治[J].中国畜牧业,2023(23):127-128.

[6] 马金锐,史文静,田常青,产单核细胞李氏杆菌内化素G单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立[J].畜牧兽医学报,2024,55(9):4069-4076.

[7] 江玲丽,高有领,胡兴娟,检测产单核细胞李氏杆菌溶血素的胶体金试纸条制备及初步应用[J].畜牧兽医学报,2022,53(6):1841-1848.

[8] 王华健,张宁,杨威,3种食源性致病菌TaqMan多重荧光定量PCR检测方法的建立[J].畜牧兽医学报,2022,53(4):1201-1209.

[9] 王亚磊,张海洋,王权,产单核细胞李氏杆菌RPA-LF快速检测方法的建立[J].中国兽医科学,2020,50(1):1-9.