羊小反刍兽疫,又被称为羊瘟,主要通过气溶胶经呼吸道传播,病羊所有分泌物和排泄物均带毒且具感染性,对我国动物卫生安全构成了严重威胁,极大地增加了动物疫病跨境传播风险。世界动物卫生组织(OIE)制定了小反刍兽疫的诊断标准和推荐方法,包括病毒分离、血清学检测、分子生物学检测等。此外,我国的研究团队在探索利用基因芯片、蛋白质组学等新技术进行小反刍兽疫的诊断和监测,以实现对疫情的更精准防控
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本文通过查阅国内外文献,全面了解羊小反刍兽疫的研究现状、诊断技术和预防措施的发展动态,根据临床情况提出综合防治方案,为养羊业提供有力的技术支持,保障养羊业的健康、稳定发展。
1 病原与流行病学
1.1 病原学特性
小反刍兽疫病毒(PPRV)属副黏病毒科麻疹病毒属,该科有诸多对人畜致病的病毒。麻疹病毒属的病毒具有共同的生物学特性,PPRV与麻疹、犬瘟热病毒等在基因结构、抗原性上有相似处。PPRV粒子多形,多为球形,直径130~390 nm,对乙醚、氯仿等脂溶剂敏感,接触后病毒包膜遭破坏,失去感染性。
1.2 流行病学特点
患病羊发病期,呼吸道分泌物、粪便、尿液等排泄物含大量小反刍兽疫病毒(PPRV)。研究显示,急性期每毫升呼吸道分泌物病毒含量可达10
5~10
7个感染单位。这些含有高浓度病毒的排泄物一旦污染周围环境,如养殖场地、饲料、饮水等,就会成为病毒传播的源头
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隐性感染羊虽然没有明显的临床症状,但体内依然携带病毒,并且能够持续排毒,在一定条件下,如机体免疫力下降时,隐性感染羊也可能发病,成为新的传染源。健康羊接触被患病羊排泄物污染的物品,可能感染小反刍兽疫病毒。山羊、绵羊等小反刍动物对该病高度易感,各品种、年龄、性别的羊均有感染风险,其中幼龄羊及免疫力低的羊更易发病,病情也更严重
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2 临床症状与病理变化
2.1 临床症状
1)典型症状。在感染初期,羊只体温会迅速升高,一般可达40~42 ℃,这种高热状态可持续3~8 d。发热期间,羊只精神萎靡,食欲明显减退,对平时喜爱的饲料和草料表现出抗拒,活动量也大幅减少,常独自蜷缩在角落。
病情发展时,病羊口炎症状显现。口腔黏膜从轻度充血发展为糜烂,初期下牙龈周围小面积坏死,后坏死区域快速蔓延至齿垫、硬腭、颊、颊乳头及舌等部位。坏死组织脱落后,形成不规则浅糜烂斑,致使羊口腔疼痛,采食、咀嚼受影响。病羊常因疼痛而流涎增多,口腔内有大量黏液流出,且呼出的气体带有恶臭。多数病羊会发生严重腹泻或下痢,粪便呈水样,且伴有腥臭味。腹泻会导致羊只迅速脱水,体重急剧下降,身体逐渐消瘦。由于脱水和营养不良,病羊的皮肤失去弹性,眼窝凹陷,精神更加萎靡不振
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2)非典型症状。部分羊只感染羊小反刍兽疫后,可能出现非典型症状。这些症状相对较轻,容易被养殖户忽视。一些羊只仅表现出轻微发热,体温升高幅度较小,一般在40 ℃以下,且发热持续时间较短,可能仅1~2 d。同时,伴有类似感冒的症状,如轻微的流鼻涕、咳嗽等,这些症状与普通感冒极为相似,很难通过这些症状判断羊只是否感染了羊小反刍兽疫。
在口腔症状方面,非典型症状的羊只口腔病变较为温和,可能仅在口腔黏膜出现少量散在的小红点,或者轻微的充血,没有明显的糜烂和坏死。这些轻微的口腔病变不会对羊只的采食和咀嚼造成太大影响,因此不易被察觉。还有部分羊只可能仅表现出短暂的腹泻症状,腹泻程度较轻,粪便形态变化不明显,持续时间较短,可能在1~2 d内自行缓解。这种轻微的腹泻症状在羊群中较为常见,容易被误认为是饮食不当或其他普通疾病引起,从而延误病情的诊断和治疗。
2.2 病理变化
1)主要器官病变。羊小反刍兽疫致使羊只主要器官有明显病理变化,口腔病变突出。口腔黏膜充血,形成大面积糜烂与坏死区域,严重时从齿龈、硬腭蔓延至颊部、舌部等,坏死组织脱落后留下不规则浅糜烂斑,表面覆灰白或黄白色伪膜。在对病死羊进行解剖时,可清晰看到口腔黏膜的病变,糜烂斑的边缘不整齐,周围组织呈现出明显的充血和水肿状态
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胃肠道的病变也较为突出。皱胃常出现出血性糜烂斑,大小不一,呈暗红色,分布在皱胃黏膜表面。肠道可见糜烂或出血,回肠、盲肠结合处有特征性线状出血或斑马样条纹。肠道黏膜坏死、脱落,肠壁变薄,屏障功能丧失。镜下见黏膜上皮细胞坏死,固有层炎性细胞浸润,肠绒毛萎缩、断裂。肺部呈肉样变和干酪样病灶。肺组织质地变硬,颜色变为暗红色或灰白色,外观呈现出肉样的质感。脾脏通常会出现肿大现象,质地变软。在脾脏表面和实质内,可见散在的坏死灶,这些坏死灶呈灰白色或淡黄色,大小不一。脾脏的白髓和红髓结构模糊,淋巴细胞数量减少,网状细胞增生。脾脏的这些病变会影响其免疫功能,导致机体免疫力下降
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2)组织学变化。在显微镜下观察感染羊小反刍兽疫的组织,可见一系列特征性的病理变化。在口腔黏膜组织中,上皮细胞发生变性、坏死,细胞间连接破坏,导致上皮层脱落。在坏死区域,可见大量炎性细胞浸润,主要包括中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞。这些炎性细胞聚集在坏死组织周围,试图清除坏死细胞和病原体,但由于病毒的持续感染,炎症反应难以得到有效控制。胃肠道黏膜上皮坏死、脱落,固有层血管扩张、充血,红细胞渗出。黏膜下层和肌层有炎性细胞浸润,组织水肿、结构紊乱。肠道绒毛顶端上皮坏死严重,绒毛变短、变粗甚至消失,影响消化吸收。脾脏淋巴细胞减少,白髓萎缩,红髓巨噬细胞增多,坏死灶周围网状细胞增生形成肉芽组织。脾脏的这些组织学变化,严重影响了其免疫功能,使得机体对病毒的清除能力下降,进一步加重了病情。
3 诊断方法
3.1 临床诊断
1)症状判断。临床症状是初步诊断羊小反刍兽疫的重要依据,需要密切关注羊只的各种表现。在症状判断过程中,首先要注意羊只的体温变化,感染小反刍兽疫的羊只通常会出现高热症状,体温可迅速升高至40~42 ℃,持续3~8 d。
在检查羊只口腔时,要注意观察糜烂斑的形态、大小和分布范围,以及口腔黏膜的充血程度。腹泻症状同样不容忽视,病羊发生严重腹泻或下痢,粪便呈水样且带有腥臭味,这是羊小反刍兽疫的典型症状之一。腹泻会导致羊只迅速脱水、体重下降,身体状况恶化
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2)流行病学调查。流行病学调查是辅助诊断羊小反刍兽疫的重要手段,通过对发病情况、传播途径等方面进行调查,可以为诊断提供有力支持。在调查发病情况时,要详细了解羊群的发病时间、发病数量、发病率和死亡率等信息。询问养殖户羊群最初出现症状的时间,以及发病羊只的数量变化情况。计算发病率和死亡率,对于判断疫情的严重程度和传播趋势具有重要意义
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3.2 实验室诊断
1)血清学检测。琼脂凝胶免疫扩散(AGID)曾广泛用于早期PPRV临床诊断。它利用琼脂糖凝胶中可溶性抗原与抗体结合形成沉淀线来检测PPRV,如采集病死羊脾脏或淋巴结,用抗血清做琼脂免疫扩散,有沉淀线则存在PPRV,反之则无。对流免疫电泳(CIEP)也常用于早期PPRV临床诊断,相比AGID,其诊断速度和灵敏度均提升,可作为临床筛选的试验方法。
酶联免疫吸附试验(ELISA)适用于大量样本检测。李雪珍等
[6]以表达的N蛋白作包被抗原建立间接ELISA法,检测137份山羊血清,与IDvet公司商品化试剂盒对比,符合率达95.6%,可用于PPR临床诊断。
胶体金技术(GICT)以胶体金为显色媒介,通过层析实现抗原抗体特异性结合来检测。将PPRV的N蛋白分别用作金标抗原、检测线(T线)包被抗原,单克隆抗体作质控线(C线)包被抗体,制成检测PPRV的N蛋白抗体胶体金免疫层析试纸条。临床血清样品检测显示,该试纸与ELISA符合率为97.6%,特异性、重复性和敏感性良好,可快速检测PPRV抗体
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2)核酸检测。普通PCR检测(PCR)是PPRV常用检测方法,依据PPRV的N、F、M等基因构建,其中N基因编码核衣壳蛋白,参与病毒复制,是主要检测基因。
实时荧光定量PCR检测(qPCR)操作简便,能量化扩增结果。荧光染色法成本低,在实验室广泛应用。芯片式数字PCR检测(cdPCR)在单分子层面绝对定量,不依赖标准曲线,可直接从大量样品中定量核酸,提升检测精度。杨鸣发等
[8]构建标准质粒并优化条件,建立PPRV
N基因cdPCR检测方法,与qPCR平行对比,结果显示该法快速、简便、特异性强、重复性好、灵敏度高,是PPRV高效检测手段。
4 预防措施
4.1 疫苗接种
目前,羊小反刍兽疫预防疫苗主要有弱毒活疫苗和灭活疫苗。弱毒活疫苗由人工致弱的小反刍兽疫病毒制成,如Nigeria75/1、Sungri/96弱毒疫苗,无副作用,可交叉保护各群毒株感染,不过热稳定性差。其免疫原性强,能刺激机体产生细胞免疫和体液免疫。细胞免疫上,弱毒病毒促使T淋巴细胞增殖分化,产生细胞毒性T淋巴细胞杀伤感染病毒的细胞。在体液免疫方面,B淋巴细胞受到刺激后会产生特异性抗体,这些抗体能够中和病毒,阻止病毒的感染和传播。弱毒活疫苗的免疫期相对较长,一般接种后可提供3~5年的有效保护。免疫副反应相对较小,大多数羊只在接种后仅有轻微的发热、精神不振等症状,一般在1~2 d内即可自行恢复。灭活疫苗的安全性较高,不存在毒力增强的风险,因为病毒已经失去了活性,不会在羊体内繁殖和引起感染。在储存和运输方面,灭活疫苗相对较为方便,一般在常温下即可保存一段时间
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4.2 饲养管理
养殖场布局需科学合理,严格划分生活区、生产区、隔离区与无害化处理区。生活区供养殖人员居住生活,应与生产区保持距离,防止疫病从生产区传入。生产区是羊只饲养的核心区域,要保证清洁卫生,定期进行消毒。隔离区用于隔离患病羊只,应设置在养殖场的下风向,与生产区之间要有严格的隔离设施,防止疫病传播。无害化处理区用于处理病死羊只和废弃物,应远离生产区和生活区,采用焚烧、深埋等方式进行无害化处理,防止疫病扩散。在布局时,要合理规划道路和排水系统,确保人员、车辆和物资的流动顺畅,同时避免交叉污染
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定期对羊舍进行全面消毒,可采用喷洒消毒剂、熏蒸等方式。在消毒剂的选择上,应选用对小反刍兽疫病毒有效的消毒剂,如过氧乙酸、碘伏、戊二醛等。在平时,每周消毒1~2次。在消毒过程中,要注意对羊舍的地面、墙壁、门窗、饲养设备等进行全面消毒,确保无死角。除了羊舍消毒,还要对养殖工具进行定期消毒。食槽、水槽等工具在每次使用后,都应进行清洗和消毒,可采用浸泡消毒或擦拭消毒的方式。养殖人员的衣物和鞋子也应定期清洗和消毒,避免将病毒带入养殖场。对养殖场的周边环境也要进行定期清理和消毒,铲除杂草,清除垃圾,减少病毒的滋生和传播场所
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5 结 语
本研究围绕羊小反刍兽疫的诊断和预防展开了深入探究,尽管在羊小反刍兽疫的诊断和预防方面取得了一定成果,但仍存在一些不足之处。在诊断技术方面,对现有诊断方法进行了优化和研究,仍需引入一些新型诊断技术,以提高诊断的准确性。