基于磁微粒化学发光免疫分析方法的禽白血病病毒检测

摘要

[目的]建立1种检测禽白血病病毒的磁微粒化学发光免疫分析方法，为禽白血病的净化提供更高效的检测工具。[方法]采用双抗体夹心法原理，选用2株针对P27蛋白的单克隆抗体分别作为包被抗体和标记抗体，配套全自动化学发光分析仪，检测禽白血病病毒P27抗原参考阳性和参考阴性样本，系统优化包被抗体和标记抗体的工作浓度、反应时间、吸样量参数，并验证建立方法的特异性、最低检测限、重复性、加速稳定性、符合率。[结果]包被抗体和标记抗体的最佳工作浓度均为0.25μg/mL，最佳反应时间为20 min，最佳吸样量为10μL；建立的CLIA检测方法与其他禽类病原无交叉反应；用阴性细胞培养上清稀释样本时，最低检测限为1 pg/mL P27蛋白，用阴性蛋清稀释样本时，最低检测限为10 pg/mL P27蛋白；重复性试验中样本测值变异系数≤5%；试剂组分在2～8℃预估可保存12个月以上，与国产商品化ELISA试剂盒的总符合率达99.8%。[结论]本研究建立的禽白血病病毒磁微粒化学发光群特异抗原检测方法特异性高、灵敏度好，重复性、稳定性和准确度达到商品化试剂盒的标准，兼具自动化、操作简便的优势。

关键词

禽白血病病毒 / P27蛋白 / 磁微粒化学发光免疫分析 / ELISA