对虾白斑综合征(
white spot syndrome, WSS)是一种由白斑综合征病毒(
white spot syndrome virus, WSSV)引起的发病快、传染性强、致死率高的疫病,是全球对虾养殖业最主要的病害之一
[1]。该病以虾体出现明显白色斑点为主要症状。病毒感染宿主范围广,包括几乎所有养殖对虾种类,其他非对虾类甲壳动物,以及某些水生昆虫幼虫和环节动物等。白斑综合征常短期内造成对虾大规模死亡,每年给对虾养殖业造成巨额经济损失。为有效防治白斑综合征,降低其对对虾养殖业的危害,本文深入探讨了对虾白斑综合征的诊断与防治措施,为对虾养殖工作提供建议与指南。
1 病原特征
白斑综合征病毒属于线头病毒科(Whispoviridae)、白斑病毒属(Whispovirus),为双链环状DNA病毒(dsDNA),病毒粒子呈短粗杆状,长度250~350 nm,直径约60~80 nm,具囊膜,无包涵体。病毒通过鳃、消化道的黏膜上皮细胞进入体内大量繁殖。在自然环境中存活能力较强,在高温环境下可被杀灭,但在4 ℃或‒20 ℃低温环境下可存活数周至数月,因此,在低温环境下,病虾或水体中的病毒仍具有传染性。病毒对脂溶剂(如乙醚、氯仿)、氧化剂(如漂白粉、高锰酸钾)和强碱性物质(如生石灰)敏感,可被此类物质消灭。
2 流行病学
2.1 宿主范围
可感染几乎所有养殖对虾种类,包括南美白对虾(
Litopenaeus vannamei)、中国对虾(
Fenneropenaeus chinensis)等,虾的幼体至成体阶段均易感,其中幼虾和仔虾的死亡率最高。其他非对虾类甲壳动物(如蟹类、小龙虾等)、某些水生昆虫幼虫和环节动物(如寡毛类)也会感染病毒,但易感性相对较差
[2]。
2.2 传播途径
主要传播途径分为水平传播和垂直传播。水平传播:一是直接接触传播,健康虾与感染白斑综合征病毒的虾接触或摄食到病虾尸体、排泄物而感染;二是间接接触传播,健康虾与被污染的水体、养殖设施、人员,携带病毒的鸟类、水生昆虫、浮游动物(如桡足类、枝角类)等接触而感染
[3-4]。垂直传播:有研究表明,白斑综合征病毒可通过亲虾卵巢传给子代,使苗种先天性感染,但垂直传播效率很低。养殖育种期间要检测种虾是否携带白斑综合征病毒,以降低垂直传播风险,保障养殖苗种健康
[5]。
3 临床症状
每年6-8月,虾苗生长到45 d、5~6 cm时,出现白斑综合征的几率较高。病虾发病前期,虾身消瘦,虾须、尾扇发红,行为异常,在池边慢游或伏卧,食欲减退或停止摄食
[6]。用显微镜观察头胸甲中央部位,可以看到雪花形、放射状白色斑点,呈散状分布、大小不同。发病后期,体表出现明显白色斑点,主要分布在头胸甲、腹甲及附肢基部,呈圆形或不规则形,大小不一,严重者白斑连成一片。虾体颜色变深黑色,肌肉失去透明感。第二触角大部分折断,头胸甲向外张开且极易剥离、腹部不连真皮易揭开。鳃肿胀、发黄。出现空胃或残胃、空肠
[7]。肝胰腺肿大、糜烂,颜色变淡,流出红色组织液。虾体活动无力,不久便死亡下沉。病程急,短则2~3 d,长则不超过7 d,即可造成80%虾发病,甚至全池虾死亡。因此,对虾体早期白斑综合征的准确诊断至关重要。
4 诊断检测
4.1 病理切片
取病虾的甲壳下表皮、鳃、肝胰腺等组织,制作石蜡切片或冰冻切片,经苏木精-伊红染色(HE染色)后镜检。如感染WSSV,将显示细胞核肿大(核内出现嗜碱性包涵体)、组织瓦解、细胞坏死等特征性病理变化。
4.2 分子生物学检测
可以根据不同需求,选择合适的聚合酶链式反应(PCR)技术检测:提取虾组织DNA,利用WSSV特异性引物(如VP28、VP19基因引物)进行PCR扩增,扩增后电泳检测分子量大小,适合普通检测;利用实时荧光定量PCR方法(qPCR)可进行定量检测,速度快、特异性强、灵敏度高,适用于早期诊断
[8];巢式PCR技术可提高检测灵敏度,适用于潜伏感染。还可以利用其他分子生物学技术检测,利用环介导等温扩增技术(LAMP)在等温条件下快速扩增,肉眼观察浊度或荧光变化,适合现场检测
[9];利用核酸杂交技术检测,其中原位杂交适合靶核酸的空间定位分析,DNA斑点杂交适合快速定性或半定量筛查大量样本。
4.3 血清学检测
血清学检测具有样本处理简单、操作简便、成本较低的优点,但检测的特异性、灵敏性低于PCR。根据免疫层析法,利用基于WSSV特异性抗体(如抗VP28单抗)的胶体金试纸条,可10~15 min检出结果,操作简单,成本较低,适合现场快速筛查;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法可以定量检测病毒抗原,但需用实验室设备操作;利用间接免疫荧光试验(IFA),能够在不对抗原抗体活性造成影响的基础上,使用荧光素对抗体进行标记,待其与相应的抗原结合后,通过荧光显微镜检测特异的荧光反应
[10]。
5 防治措施
5.1 预防与管理
1)预防措施。定期对养殖设施严格消毒,养殖前每667 m2池塘用100~150 kg生石灰或20~30 kg漂白粉彻底清塘。做好苗种管理,选择无特定病原(SPF)苗种,放养前用0.5~1 mg /L聚维酮碘溶液浸浴5~10 min。控制放养密度,每667 m2放养南美白对虾3万~5万尾或斑节对虾1万~2万尾。遵循“养虾先养水、养水先养底”原则,进行预防性水体消毒,每隔10 d,全池泼洒噬菌蛭弧菌等生物消毒剂或中药消毒剂,尽量避免使用化学消毒剂,以免破坏水体,导致对虾应激。做好生物安全管理,养殖池塘进水需经过孔径为0.18 mm的筛网过滤,防止野杂鱼、水生昆虫等进入池塘,切断野生甲壳类进入池塘的途径,以防其携带病毒造成健康虾感染。
2)综合管理。坚持“预防为主,综合防控”原则。做好日常巡塘,观察对虾摄食、活动及水体透明度、气味等情况,发现异常情况及时处理。做好水质与底质调控,定期检测水质指标,保持水温25~30 ℃,pH值7.8~8.6,溶氧量≥5 mg/L,氨氮≤0.2 mg/L,亚硝酸盐≤0.1 mg/L,有机质含量≤5 mg/L,根据水质变化,适时适量换注新水;定期泼洒光合细菌等微生物制剂,调节水体生态平衡。保证水体中有充足的氧气,每天凌晨、中午开增氧机数小时,消除水体分层造成的缺氧;遇异常天气,如大雨、低气压等,要延长增氧机开机时间,排去表层淡水;发现虾有浮头迹象,施用增氧片。做好饲料管理,投喂优质的全价配合饲料,饵料系数要有保障,避免使用霉变或劣质饲料
[11];每天投喂 3~4次,定时定点投喂,根据天气变化、水质状况、蜕壳情况、用药情况、生物饵料数量等确定投喂量,以对虾在1~1.5 h内吃完为宜,避免残饵污染水质;在饲料中添加免疫增强剂(如酵母多糖、维生素C),添加量为饲料重量的0.2%~0.5%。在养殖中后期,每3~5 d,用孔径较小的旋网在池塘四周随机抽样200~300尾对虾,检查其健康情况。
5.2 治疗方法
白斑综合征目前尚无有效药物可治疗。通过围栏封闭池塘综合技术,及时将病虾隔离,保护其他池塘养殖虾苗的安全。根据上海海洋大学对虾病害防治处方(课题组推荐),对虾白斑综合征可采取如下处方治疗。每立方米水体用0.6 g纯中药制剂鱼虾改毒散煮水后全池泼洒,1次/d,连用2次后,每立方米水体分别用0.35 g病毒净和0.4 g菌毒消全池泼洒,1次/d,连用2次。每667 m3水体,用250 mL本草泼洒剂全池泼洒,1次/(15~20 d);同时每千克饲料,用1.5~3.0 g免疫保肝多维拌饲投喂,1次/15 d。另外,发病初期也可投喂含抗病毒中草药的制剂,例如板蓝根15 g/kg饲料、大黄20 g/kg饲料,连续投喂7~10 d。通过泼洒葡萄糖(5~10 kg/667 m2)和维生素C(1~2 kg/667 m2)缓解病虾应激反应。打开增氧机或使用增氧剂,禁止大排大灌,减半投喂饲料或停止投料。对周边水体用0.3~0.5 mg /L二氧化氯或0.2 mg /L溴氯海因全池泼洒消毒,1次/d,连续2~3 d。及时捞出病死虾,集中焚烧或深埋,防止病毒传播。
6 结 语
对虾白斑综合征作为全球对虾养殖业的重要威胁,其高传染性与高致死率会对产业经济造成显著损失。本文系统梳理了该病的病原特征、流行病学规律、临床症状、诊断检测方法及综合防治策略。强调“预防为主,综合防控”的科学理念,通过日常养殖管理与预防、流行病学调查及临床症状观察、分子生物学等技术早期精准诊断、发病后的应急处置与规范治疗,可有效降低疾病暴发风险。
未来需进一步深入研究白斑综合征病毒不同毒株的特性差异,明确其传播机制、致病原理以及与宿主的相互作用关系;研发白斑综合征高效疫苗,根据其免疫系统特点与免疫机制,优化免疫程序与接种方式,提高疫苗免疫效果;构建多层次、全流程疫病防控体系,加强对虾养殖从业者的技术培训,提高疾病防控能力,以保障对虾养殖业的可持续发展。