贵州铜仁市售鱼类嗜水气单胞菌感染情况调查

Investigation on the infection of Aeromonas hydrophila in fish sold in Tongren City, Guizhou Province

摘要

目的 调查贵州省铜仁市部分地区市售鱼类嗜水气单胞菌流行情况和耐药性，为该病的防治提供科学依据。 方法 2022年2月－2023年5月从铜仁市部分乡镇超市、集贸市场和饭店采集5种、182尾鱼组织样本，调查嗜水气单胞菌流行情况；采用药敏试验测定本研究分离获得的嗜水气单胞菌对常见抗菌药的耐药性。 结果 182尾鱼中有18尾感染嗜水气单胞菌，平均检出率为9.89%，其中鲤、鲫、鳊、草鱼和黄颡鱼检出率分别为9.68%、6.12%、11.76%、11.54%和11.86%；不同季节中以夏季和秋季来源样品检出率偏高，分别为14.29%和12.73%，而春季和冬季检出率偏低，分别为8.11%和2.44%；集贸市场、超市和饭店来源样品嗜水气单胞菌检出率分别为5.88%、9.90%和16.67%。18株嗜水气单胞菌对阿莫西林、利福平和新霉素耐药率均超过70%，对氟苯尼考、庆大霉素、复方新诺明、头孢他啶、环丙沙星和左氧氟沙星敏感率均超过70%。 结论 铜仁市部分地区市售鱼类存在嗜水气单胞菌感染，对公共健康具有潜在的威胁。

Abstract

Objectives The prevalence and drug tolerance of Aeromonas hydrophila in fish sold in some areas of Tongren City, Guizhou Province was investigated to provide scientific basis for the prevention and control of the disease in fish. Methods 182 fish tissue samples of 5 species were collected from supermarkets, wholesale markets, and restaurants in some townships of Tongren City, Guizhou Province, to investigate the prevalence of Aeromonas hydrophila from February 2022 to May 2023. The antimicrobial susceptibility test was used to determine the drug tolerance of A. hydrophila isolated to common antibiotics. Results Among the 182 fish, 18 were infected with Aeromonas hydrophila, with an average detection rate of 9.89% (18/182). The detection rate of crucian carp, silver carp, bighead carp, grass carp, and yellow catfish was 9.68% (3/31), 6.12% (3/49), 11.76% (2/17), 11.54% (3/26), and 11.86% (7/59), respectively. The detection rates of samples from different seasons were higher in summer and autumn at 14.29% (7/49) and 12.73% (7/55), and lower in spring and winter at 8.11% (3/37) and 2.44% (1/41), respectively. The detection rate of A. hydrophila in samples from wholesale markets, supermarkets, and restaurants was 5.88% (3/51), 9.90% (10/101), and 16.67% (5/30), respectively. 18 isolates of A. hydrophila had resistance rate of over 70% to amoxicillin, rifampicin, and neomycin, with the sensitivity rate of over 70% to florfenicol, gentamicin, compound sulfamethoxazole, ceftazidime, ciprofloxacin, and levofloxacin. Conclusions Some fish sold in certain areas of Tongren City, Guizhou Province were infected with Aeromonas hydrophila, posing a potential threat to public health.

关键词

鲤 / 鲫 / 鳊 / 草鱼 / 黄颡鱼 / 嗜水气单胞菌 / 抗菌药 / 耐药性

Key words

crucian carp / silver carp / bighead carp / grass carp / yellow catfish / Aeromonas hydrophila / antibacterial drugs / drug tolerance

嗜水气单胞菌在自然界广泛分布，是一种十分常见的人－畜－鱼共患的细菌性病原，该病原可感染多种陆生和水生动物。临床上，嗜水气单胞菌感染可引起多种鱼类（包括草鱼、鲤、罗非鱼和青鱼等）出现大规模死亡，给水产养殖业造成巨大的经济损失^[1-2]。此外，嗜水气单胞菌还可以通过食物和饮水等感染人类，导致患者出现腹泻、败血症、脑膜炎和急性胃肠炎等，对公共安全造成巨大的威胁^[3-4]。

嗜水气单胞菌属于条件性致病菌，外表健康的鱼群可能携带或感染该病原。高子惠等^[1]采用LAMP检测方法从74份鱼类样品中检测到6例嗜水气单胞菌；单晓枫等^[5]从外表健康的乌鳢组织样品中共分离到301株细菌，其中嗜水气单胞菌107株，分离率为35.55%；刘训猛等^[6]从江苏地区健康和发病鱼群中均成功分离获得嗜水气单胞菌，其部分分离株具有溶血特性。由此可见，感染嗜水气单胞菌的市售鱼类可能危害消费者健康。

贵州省渔业资源丰富，部分地区消费者有吃“鱼生”的习惯，了解市售鱼类常见人畜共患病原污染（感染）情况对于保障消费者健康十分重要。然而，目前未见关于市售鱼类嗜水气单胞菌流行情况调查的相关研究，这不利于该病的综合防控。因此，本研究通过调查了解铜仁市部分地区市售鱼类嗜水气单胞菌感染情况，并分析分离菌对不同抗菌药的耐药性，有助于深入了解该病原菌的流行特征及其耐药机制，为制定相应的防控策略提供重要的参考依据。

1 材料与方法

1.1 样品来源

本研究开展于2022年2月－2023年5月，从铜仁市松桃苗族自治县、江口县、思南县和玉屏侗族自治县部分超市、集贸市场和饭店收集5种鱼类（鲤鱼、鲫鱼、鳊鱼、草鱼和黄颡鱼）共计182尾。用无菌手术剪或手术刀切取少量鱼背肌肉10~20 g/尾，置于无菌封口袋内，标记相关信息（包括鱼品种、采样地点和时间等）后将样品低温送至病原诊断实验室。

1.2 细菌分离与鉴定

在无菌环境（超净工作台下）切开鱼肉深层组织，用灭菌的接种环蘸取少量组织液于鲜血琼脂培养基表面进行平板划线，其后将培养基放置于37 ℃恒温箱中，18~24 h后观察培养基表面是否存在疑似菌落。将疑似菌落进一步在气单胞菌琼脂培养基进行纯化和鉴定，其后采用革兰氏染色法对疑似菌落进行染色镜检，根据菌株的形态学特征进行鉴定。

将疑似嗜水气单胞菌分离株接种于液体培养基中，于37 ℃摇床内培养16~18 h，其后收集少量菌液送至贵州擎科生物有限公司，委托其对分离株的16S rDNA序列进行PCR扩增、测序与分析，旨在对分离株进行分子鉴定。

1.3 药物敏感试验

使用无菌生理盐水将扩增的菌液稀释至10⁶ CFU/mL，取100 μL菌液将其均匀涂布于琼脂培养基表面，将其倒置于恒温箱内2~3 min，使菌液稍干；其后在培养基平皿上贴上含有不同种类抗菌药的纸片（每个平皿贴4种纸片）。最后将培养基平皿放置于37 ℃恒温箱内培养24 h，采用游标卡尺测量各药敏纸片对应的抑菌直径，根据药敏纸片说明书判定嗜水气单胞菌分离株对各抗菌药的耐药性。

1.4 流行病学分析

采用Excel软件对铜仁市不同地区、不同品种、不同季节和不同采样地点来源鱼类进行统计，计算嗜水气单胞菌感染率，分析其流行特征。

2 结果与分析

2.1 市售鱼类嗜水气单胞菌感染情况

铜仁市4个县部分地区市售鱼类细菌携带情况调查结果显示，从112尾鱼组织中分离获得疑似菌落，其中29尾鱼疑似感染嗜水气单胞菌，分离菌在鲜血琼脂培养基表面为半透明状淡黄色或灰白色的圆形菌落，直径为1~3 mm，且表面相对黏稠，部分细菌会在培养基表面出现β-溶血现象。

将疑似嗜水气单胞菌在气单胞菌琼脂上进行鉴别培养与纯化，发现仅18株疑似嗜水气单胞菌可正常生长，为表面光滑、圆形的红色或粉红色菌落。进一步经革兰氏染色试验发现，其为革兰氏阴性菌（单个或多个排列短杆状阴性菌）。

PCR扩增、测序与分析结果表明，分离获得的18株疑似菌与已知嗜水气单胞菌同源性最高（均超过99.3%），提示其为嗜水气单胞菌。

由表1可见，182尾鱼类嗜水气单胞菌平均感染率为9.89%；进一步分析发现不同地区市售鱼类嗜水气单胞菌感染率差异较小，其中江口县来源样品检出率稍高，为12.5%，而松桃苗族自治县、思南县和玉屏侗族自治县来源样品检出率稍低，分别为9.30%、9.76%和9.68%。不同品种中以鳊、草鱼和黄颡鱼嗜水气单胞菌感染率偏高，分别为11.76%、11.54%和11.86%，鲤鱼感染率稍低，为9.68%，而鲫鱼来源样品检出率最低，为6.12%。

2.2 不同季节和采样点市售鱼类嗜水气单胞菌感染情况

由表2可见，不同季节市售鱼类嗜水气单胞菌感染率差异较大，其中夏季和秋季来源样品检出率偏高，分别为14.29%和12.73%，春季次之，为8.11%，而冬季采集的鱼类嗜水气单胞菌感染率最低，为2.44%；此外，不同采样地点中以饭店来源样品检出率最高，为16.67%，超市和集贸市场来源样品检出率偏低，分别为9.90%和5.88%。

2.3 嗜水气单胞菌对不同抗菌药的耐药性

采用药敏纸片法测定本研究获得的18株嗜水气单胞菌对11种抗菌药的耐药性，结果如表3所示。18株嗜水气单胞菌对利福平、阿莫西林和新霉素敏感率均为0，耐药结果分别为17/18、14/18和13/18；对环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明、庆大霉素和四环素耐药率均为0；对环丙沙星、头孢他啶和四环素敏感率均超过80%，分别为17/18、15/18和16/18。

3 讨 论

嗜水气单胞菌是一种十分常见的人－畜－鱼共患性病原，其感染可引起鱼类体表出血和溃疡等多种临床症状，并导致较高的死亡率，给我国渔业发展造成巨大的经济损失^[7-8]。此外，嗜水气单胞菌为条件致病菌，假定健康鱼群有可能携带该病原，而消费者在剖杀鱼类的过程中可能接触该病原，甚至部分地区有吃“鱼生”的习惯，导致人们在处理和消费鱼类的过程中感染嗜水气单胞菌，继而引发严重的临床疾病，威胁消费者的健康^[9-11]。因此，调查市售鱼类嗜水气单胞菌感染情况对于保障消费者健康具有积极意义。

本研究从铜仁市部分地区采集的市售鱼组织中分离获得疑似菌落，通过鉴别培养和分子生物学鉴定发现，18尾鱼感染嗜水气单胞菌，其平均感染率为9.89%，且不同地区均存在嗜水气单胞菌感染的市售鱼类，说明该病原广泛流行于铜仁市被调查的地区，这需要引起相关养鱼企业（户）和卫生部门的重视。进一步分析发现，5种市售鱼类可感染嗜水气单胞菌，但感染率差异较大，其中鳊、草鱼和黄颡鱼感染率偏高，而鲫和鲤感染率偏低，这可能是由于不同鱼类对该菌的易感性具有差异，或本研究调查样品数量偏少。但总体而言，消费者在处理鱼的过程中需要注意卫生，且尽量少吃“鱼生”。

此外，不同季节中以夏季和秋季市售鱼类嗜水气单胞菌感染率偏高，而春季和冬季来源样品检出率偏低，这主要是由于夏季和秋季气温较高，且相对潮湿，这有利于细菌的繁殖和存活，由此促进了该病原的流行和传播。分析不同采样地点来源样品嗜水气单胞菌检出率差异，发现饭店和超市来源样品鱼类嗜水气单胞菌感染率最高，而集贸市场偏低，这主要是由于超市活鱼并非“当日购买，当日售完”，部分免疫力较差的“剩鱼”发病风险提高；饭店来源样品数量较少，使得真实检出率还需要进一步采样调查；集贸市场鱼类多为“当日购买，当日售完”，鱼类相对健康，感染嗜水气单胞菌的风险相对较低。

抗生素的长期使用会导致部分菌株对多种抗生素产生耐药性，这严重影响嗜水气单胞菌感染的治疗效果，甚至对公共健康造成威胁^[12-13]。药物敏感性试验发现，18株嗜水气单胞菌对利福平、阿莫西林和新霉素耐药率均超过70%，未来应避免使用以上抗生素用于鱼类嗜水气单胞菌病的防治。以上分离株对庆大霉素、复方新诺明和环丙沙星等抗生素耐药率均为0，且敏感率均超过70%，可选用部分敏感抗菌药防治鱼类嗜水气单胞菌病，如环丙沙星和复方新诺明等，但需制定合理的用药方案，避免滥用药物导致耐药菌株的出现和流行。

参考文献

[1] 张杰.致病性嗜水气单胞菌耐受性及其相关蛋白HSP60的分离与鉴定[J].养殖与饲料，2024,23(6)：1-6．

[2] XIONG C Y， LIU K M， WU Y P，et al.Decreased pathogenicity of triple-mutant of Aeromonas hydrophila flgK，flgL，flgE suggests its potential as a live attenuated vaccine for Carassius auratus [J/OL]．Fish & shellfish immunology，2025，165：110486[2025-06-03]．

[3] LUO D， DAI L W.A 26-year-old man with multiple organ failure caused by Aeromonas dhakensis infection：a case report and literature review[J/OL].Frontiers in medicine，2024，11：1289338[2025-06-03].

[4] 刘文东，李国梁，邢宝瑞，等.嗜水气单胞菌致脓毒性休克2例[J].中医正骨，2023，35(5)：75-78．

[5] 单晓枫，张冬星，康元环，等.长春市售乌鳢携带嗜水气单胞菌情况调查[J].中国兽医杂志，2018，54（1）:95-97.

[6] 刘训猛，习丙文，胡翔，等.江苏地区渔源嗜水气单胞菌流行病学调查[J].安徽农业大学学报，2017，44（3）:381-387.

[7] DONG J， LI S P， ZHOU S，et al.Novel insights into the therapeutic effect of amentoflavone against Aeromonas hydrophila infection by blocking the activity of aerolysin[J/OL].International journal of molecular sciences，2025，26(5)：2370[2025-06-03].

[8] 王会林，晋怀远，高晔，等.美洲鲥鱼嗜水气单胞菌病原的分离与鉴定[J]渔业科学进展，2024，45(2)：257-266．

[9] 帅小博，陈彬，余雯，等.一起混合性气单胞菌引起食源性疾病暴发的病原学检测[J].实验室检测，2024(6)：157-160．

[10] 罗会平，毛琦，依旺，等.一起嗜水气单胞菌引起的食源性疾病暴发事件调查[J].现代疾病预防控制，2023，34(11)：880-884．

[11] SHANKAR S， SAHU V， KUMAR A，et al.Endogenous endophthalmitis caused by Aeromonas hydrophila following intravenous blood transfusion[J/OL].BMJ case reports，2025，18(4)：e264991[2025-06-03].

[12] LOU H H， LI Y， WU Y J，et al.Infection status，etiological analysis of Aeromonas spp．in foodborne diarrhea patients from 2019 to 2023 in Wenzhou[J].Foodborne pathogens and disease，2025，22(6)：414-421．

[13] PUVAČA N， LJUBOJEVIĆ PELIĆ D， PELIĆ M，et al. Microbial resistance to antibiotics and biofilm formation of bacterial isolates from different carp species and risk assessment for public health[J/OL].Antibiotics，2023，12(1)：143[2025-06-03].