湖北省十堰市县级兽医实验室检测能力比对分析

Comparative analysis of the capacity of testing in county-level veterinary laboratories in Shiyan City, Hubei Province

摘要

目的 为提升十堰市县级兽医实验室检测能力，强化兽医实验室质量管理。 方法 对十堰市动物疫病预防控制中心2013－2024年陆续开展的10次多种形式兽医实验室检测能力比对工作数据和结果进行深度分析，涉及的试验方法主要有酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光PCR检测技术、凝集试验等关键检测方法。 结果 由于各方法技术掌握不均衡，检测过程中影响因素多的检测方法如血凝及血凝抑制试验（HA-HI）及液相阻断ELISA等比对结果符合率低，分别为59.5%、80%。此外，受实验室质量管理和人员队伍等因素的影响，各实验室检测能力发挥不稳定。 结论 县级实验室在人员队伍稳定性、影响因素多的检测技术掌握度和质量管理规范性等方面仍面临挑战。因此，需从优化人才队伍结构、加强技术专项培训、完善质量管理体系等方面进行系统推进，同时采用多元化的能力评价方式，全面提升县级兽医实验室的检测能力和管理水平。

Abstract

Objectives The capacity of testing in county-level veterinary laboratories in Shiyan City was improved to strengthen the quality management of veterinary laboratories. Methods An in-depth analysis was conducted on the data and results of 10 comparisons of various forms of the capacity of testing in veterinary laboratory including Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), Fluorescent PCR, and agglutination tests conducted by Shiyan Center for the Prevention and Control of Animal Diseases from 2013 to 2024. Results Methods of detection with multiple affecting factors including hemagglutination and hemagglutination inhibition assay (HA-HI) and liquid-phase blocking ELISA had lower concordance accuracy rate of 59.5% and 80%, due to the uneven mastery of various methods and technologies. The capacity of testing in each laboratory was unstable due to factors including laboratory quality management and personnel team. Conclusions County-level laboratories still face challenges in terms of personnel stability, mastery of testing techniques with multiple affecting factors, and the standardization of quality management. Therefore, it is necessary to systematically promote the optimization of talent structure, strengthen specialized technical training, improve management system of quality, and adopt diversified methods of evaluating proficiency to comprehensively enhance the capacity of testing and management level in county-level veterinary laboratories.

关键词

兽医实验室 / 检测能力 / 实验室质量管理 / 人员队伍建设 / 技术培训

Key words

veterinary laboratories / capacity of testing / management of laboratory quality / development of personnel team / technical training

兽医实验室作为我国动物疫病防控体系的重要组成部分，在动物疫病诊断、监测、检测工作中发挥重要作用^[1-2]，对疫病有效防控、食品安全保障及公共卫生安全维护等方面具有重要意义，而兽医实验室检测能力是确保动物疫病防控效果的重要因素^[3-4]。检测能力比对是指在预定条件下，对同一或相似的检测对象进行测量或检测的组织、实时和评价活动^[5-7]，是科学评价和提升兽医实验室管理水平和检测能力的重要手段^[8]。2009年《兽医实验室考核管理办法》颁布以来，十堰市除积极参加省级组织的能力验证外，自2013年起累计组织开展了10次能力比对工作。本文通过对比对情况及结果进行客观分析，旨在找出基层兽医实验室管理和检测环节中的薄弱点，为提升县级兽医实验室整体水平提供参考。

1 材料与方法

1.1 比对范围

涵盖全市6个县级（房县、郧阳、郧西、丹江、竹山、竹溪）兽医实验室，血清学能力比对要求所有实验室均参加，病原学能力比对仅限于具备相应检测能力的实验室参加。

比对形式分为省级比对和市级比对，省级比对方案未覆盖的县级实验室参加市级比对。除2017－2018年因市级兽医实验室重建未组织比对活动、2021年举办全市检测能力技能竞赛外，每年均组织参加各种形式的比对活动，历年检测能力比对形式见表1。

1.2 比对样品与试剂

采用盲样测试法^[9]，比对样品由十堰市动物疫病预防控制中心兽医实验室制备。制备方式：日常检测的阳性样品稀释，经多次多人验证，分装而成。每个比对项目设置5份盲样，其中设置2个阳性、2个阴性和1个弱阳性样本，阳性样品一般设置为平行样本。在规定的时间内统一发放，冷链运输。单个样本计量足够2~3次的检测量。检测试剂由各县市根据比对方案自行采购，如果当年提供的阳性盲样由特定试剂的阳性血清稀释而成，则由市级提供相应的试剂，并在方案中说明。

1.3 比对项目方法和判断标准

截至2019年，十堰市县级实验室均仅具备血清学检测能力，检测项目以血清学方法为主，自2020年起，各县市陆续完成兽医实验室病原学检测改造升级，比对逐步引入病原学检测项目。

在确定年度检测项目时，兼顾检测方法的全面性，结合当年重点培训内容以及各实验室的实际能力，每年设置3~4个检测项目，例如2022年设置了非洲猪瘟病毒（ASFV）病原检测，是因为2022年2/3的县级实验室改造完成，具备病原学检测能力，但未完成兽医实验室改造的实验室仍以血清学检测为主。检测结果判定标准以是否与参考值符合来判定，不同的方法设置不同的误差范围。历年来的比对项目见表1，各方法的判断标准见表2。

1.4 结果上报与统计

参加比对的实验室应在领取样品后的3 d内独立完成试验，并于第3天提交统一格式的结果报告表（电子版），同时报送检测报告的纸质版及原始记录。市动物疫控中心收到结果报告、检测报告、原始记录后进行结果评判，汇总比对过程中发现问题及时通报，要求各实验室认真分析总结，加强内部培训，切实提升检测能力。

2 结果与分析

2.1 病原学检测能力

为提升十堰市病原学检测能力，从2019年起组织开展荧光PCR检测方法的培训及兽医实验室改造升级，至2022年全市除1家县级实验室外，均完成兽医实验室改造升级。通过2021年在市级实验室集中开展技能竞赛，十堰市县级兽医实验室检测员基本掌握荧光PCR方法。由表3可知，荧光PCR方法结果符合率为97.6%。县市实验室参与20次，检测项目主要为3个实验室常检项目；从比对方式来看，无论是省、市组织的比对，还是组织的集中技能竞赛（每县2人参加），结果都比较满意，仅2次不符合。2022年不合格的主要原因是未按比对方案规定使用市级提供的检测试剂（2022年提供的阳性样品是由特定检测试剂盒阳性血清稀释而成），将2份阳性比对样品全部做出阴性结果的判断。

2.2 酶联免疫吸附试验（ELISA）检测能力

从比对结果来看，检测方法简单的ELISA方法完全掌握，仅在2013、2014年检测结果出现差异，但在市县各级实验室的努力下，经过培训完全掌握了该方法。而液相阻断法的符合率仅80%，几乎每年、每个县均出现错误。

2.3 凝集试验检测能力

布病的虎红平板凝集试验和试管凝集试验均完全掌握，符合率为100%，但血凝和血凝抑制试验一直是县级兽医实验室的难点。

从凝集试验检测方法比对结果（表5）来看，结果符合率仅59.5%。

2021年技能竞赛中，组委会提供1%红细胞和4单位的抗原，结果符合率仅50%，在参加的12个选手中没有1个选手完全正确，结果正确率与从事实验室检测工作年限呈正相关（表6），一般同一实验室中工作年限长的选手结果符合率更高，其另一位选手也能取得相对较好的成绩。C县1名选手将以水作为盲样的样品做出阳性结果，该选手从事实验室检测仅半年时间。

2.4 不同实验室检测能力

基于平行样本比对结果和检测报告等原始记录分析表明，各县市检测能力呈现显著不稳定性，且波动幅度较大，但不同县市实验室之间能力差异相对较小。这主要与县级实验室人员调动频繁，质量管理体系不完善、未有效开展内部质量控制与监督机制，检测标准库未能及时更新与核准，以及实验室技术培训力度不足相关。值得注意的是，当上级主管部门将实验室工作列为重点监管领域，或本级主管部门强化实验室管理力度时，比对结果符合率通常会有所提升，同时检测报告及原始记录的错误率呈明显下降趋势。

3 讨 论

3.1 检测技术掌握不均衡

从历年比对结果分析，实验室对不同检测技术的掌握程度存在显著差异。平板凝集试验、试管凝结试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）中间接ELISA和阻断ELISA结果符合率为100%，荧光PCR检测方法结果符合率为97.6%；但操作流程复杂或依赖主观判读的检测方法，如口蹄疫液相阻断ELISA、禽流感血凝抑制试验（HA-HI）等，仍然是技术能力的薄弱环节^[8]，比对结果符合率仅为80%、59.5%。以口蹄疫液相阻断ELISA为例，早期因流程复杂、操作步骤多，导致实验室间结果离散度大，重复性差；而2024年通过引入操作流程简化、反应时间缩短且预混程度更高的优化的口蹄疫检测试剂盒，显著降低了操作难度和人为误差，比对结果符合率显著提升。血凝抑制试验（HA-HI）作为评估禽流感免疫效果的核心检测方法，受红细胞悬液、4单位抗原精准配制等关键环节的人为因素影响，历年的比对数据表明，不正确结果大部分分布在±2个滴度偏差的范围内，但有个别县市结果偏差超过3个滴度，甚至存在强阳性样本判为阴性的严重错误。因此，各实验室应加强对复杂检测技术的专项培训和基础操作的常态化训练，确保结果的准确性，而针对新技术、新方法或在常规培训中难以掌握的检测技术有必要结合“送出去”和“请进来”的培训方式，在检测试剂的选择上也尽可能选择影响因素少、性能稳定、质量可靠的检测试剂，持续加强技术能力建设。

3.2 人员队伍稳定性不足

十堰市县级兽医实验室检测能力呈现明显波动，与人员队伍的稳定性密切相关。从历年的比对结果来看，2021年前检测队伍相对固定，正确率稳步上升，但从2022年开始，各县市陆续开展机构改革，核心检测人员流失，新生检测力量跟不上，导致县级实验室检测能力下滑，个别实验室因技术骨干缺失而一度陷入无法正常开展检测工作的困境。目前，十堰市县级实验室普遍面临专职检测人员短缺问题，多数实验室仅配备1名专职检测的人员，这种脆弱的人员结构使得实验室应对人员变动的能力十分有限。因此，加强专业人才队伍建设，建立合理的人才梯队和后备力量培养机制，已成为提升实验室检测能力稳定性的关键。

3.3 质量管理体系不完善

实验室质量管理体系的完善程度直接影响检测结果的可靠性^[4]。纵观历年提交的比对报告和原始记录，虽然整体规范性呈提升趋势，但部分实验室出现记录不完整或者前后不一致的情况。说明各实验室管理体系未能正确运行或行之有效，部分标准操作程序（SOP）需要进一步完善，一些关键步骤缺乏有效的监督。值得注意的是，部分实验室对能力比对工作存在被动应付现象：2016年前，十堰市将县级比对工作和年度工作考核目标任务结合，部分实验室为确保实际检测结果的准确性，与其他实验室合作完成比对任务，虽然检测结果符合率高，但不能完全反映该实验室的检测能力。2016年后比对结果的准确性不纳入年度工作考核目标任务，部分实验室对比对工作出现敷衍倾向。这说明质量管理的内生动力不足，未充分理解实验室能力比对工作的意义和重要性。因此，建议将能力比对作为提升内部管理的契机，针对比对中出现的问题，深层次地挖掘内在原因，制定行之有效的措施，持续加强兽医实验室规范化管理，强化人、机、环、法、料的可控性管理，同时在日常检测活动中引进监督和考核机制，系统提升实验室质量管理水平。

3.4 检测能力评价方式需多元化

当前采用的检测能力评价方式各有侧重，但也存在局限。省级比对试验设计严谨但覆盖率不足；技能竞赛能侧重个人检测能力，难以评价实验室整体质量管理和综合运行水平；市级比对试验可综合评价实验室检测能力但无法体现个人技术差异。因此，需要建立多元化的能力评价体系，通过综合运用盲样考核、现场评审、数据比对、人员间比对等多种形式，形成评价合力，从而更全面、精准地把握县级实验室在管理、技术、人员等各方面的真实状况^[9]。同时，各县市应当正确认识能力比对的定位，将其作为发现问题、改进工作的工具，而非单纯的考核手段，从而真正发挥能力比对在提升实验室整体能力方面的作用。

4 结 论

2013－2024年，十堰市县级兽医实验室检测能力比对结果客观反映了十堰市县级实验室建设和管理的现状，当前县级实验室在人员队伍稳定性、复杂技术掌握度和质量管理规范性等方面仍面临挑战。未来需从优化人才队伍结构、加强技术专项培训、完善质量管理体系等方面系统推进，同时采用多元化的能力评价方式，全面提升县级兽医实验室的检测能力和管理水平。

参考文献

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