1例肉牛魏氏梭菌病和寄生虫病混合感染的诊治

Diagnosis and treatment of a case of mixed infection with Clostridium welchii and parasitic diseases in beef cattle

摘要

目的 明确混合感染引发肉牛急性猝死的致病因素，为肉牛养殖中此类混合感染性疾病的防治提供技术支撑。 方法 2021年10月，某地3户养殖户饲养的本地黄牛发生急性猝死事件，对该疫情的发病情况、临床症状进行系统调查，对病死牛进行病理剖检，采集血液样本及肠管病变组织开展实验室检测（包括姬姆萨染色、瑞氏染色、革兰氏染色等），结合牧地环境明确病因，并制定实施针对性综合防控措施。 结果 剖检发现，病死牛小肠中后段及结肠前段肠管极度充血红肿、质地脆弱，肠黏膜有点状或斑状出血，肠腔内充满暗红色或酱油色内容物；实验室检测在肠管病变组织中检出大量符合魏氏梭菌形态特征的革兰氏阳性大杆菌，血液样本中观察到红细胞形态异常，且检测出附红细胞体、梨形虫等病原体，所有发病及存活牛只体表均有蜱虫寄生。结合气温骤降、降雨等环境因素，确诊本次疫情为魏氏梭菌病与寄生虫病（附红细胞体病、梨形虫病）混合感染，叠加冷应激、氢氰酸中毒风险、低镁低钙血症等多种因素诱发的急性猝死综合征。通过实施病死牛无害化处理、寄生虫防控、魏氏梭菌病防控、营养补充及饲养管理优化等综合措施，疫情得到有效控制，1周后无新增死亡病例，1个月后所有牛只均健康存活。 结论 本次肉牛急性猝死是多因素共同作用的结果，寄生虫感染导致牛只体质及免疫力下降，为魏氏梭菌入侵创造了条件，气温骤变等环境因素是重要诱因。加强科学养殖与日常管理，做好寄生虫及常见传染病防控，建立健全疫病防控体系，是预防此类混合感染性疾病的关键。

Abstract

Objectives The pathogenic factors, diagnostic methods and effective measures for the prevention and control of acute sudden death in beef cattle caused by mixed infection was studied to provide technical support for the prevention and treatment of such mixed infectious diseases in farming beef cattle. Methods An acute sudden death occurred in local cattle raised by 3 farmers in Guiding County, Qiannan Buyi and Miao Autonomous Prefecture, Guizhou Province in October 2021. A systematic investigation was conducted on the incidence and clinical symptoms of the epidemic. Pathological autopsy was performed on the dead cattle. Samples of blood and intestinal lesions were collected for laboratory testing including Giemsa staining, Wright staining, Gram staining, etc. The causes were identified and comprehensive and targeted measures for prevention and control were developed and implemented based on the pastoral environment. Results The intestines of the middle and posterior small intestine and the anterior colon of the deceased cow were extremely congested, red, swollen, and fragile, with punctate or spotted bleeding in the intestinal mucosa, and the intestinal cavity was filled with dark red or soy sauce colored substance. A large number of Gram-positive macrobacteria conforming to the morphological characteristics of Clostridium welchii were detected in the intestinal lesions. Abnormal morphology of red blood cell was observed in the samples of blood, and pathogens including Eperythrozoon and piriform were detected. All affected and surviving cattle were parasitized by ticks on the surface of their bodies. The epidemic was diagnosed as a mixed infection of Clostridium welchii disease and parasitic diseases (eperythrozoonosis, pirozoosis) based on environmental factors including sudden drops in temperature and rainfall and combined with various factors including cold stress, the risk of hydrocyanic acid poisoning, hypomagnesium, hypocalcemia and other factors leading to acute sudden death syndrome. The epidemic was effectively controlled by the implementation of comprehensive measures including harmless treatment of dead cattle, prevention and control of parasites and Clostridium welchii disease, nutritional supplementation and optimization of feeding management. There were no new deaths one week later. All cattle survived healthily one month later. Conclusions The acute sudden death of beef cattle this time was the result of multiple factors working together. Parasitic infection caused a decline in the physical fitness and immunity of the cattle, creating conditions for the invasion of Clostridium welchii. Environmental factors such as sudden changes in temperature were important inducements. The key to prevent such mixed infectious diseases is to strengthen scientific farming and daily management, do well in the prevention and control of parasites and common infectious diseases, and establish a perfect system of preventing and controlling epidemic.

Graphical abstract

关键词

肉牛 / 魏氏梭菌病 / 寄生虫病 / 混合感染 / 环境因素

Key words

beef cattle / Clostridium welchii disease / parasitic diseases / mixed infection / environmental factors

肉牛养殖业是多地农业农村经济的重要组成部分，本地黄牛作为常见主导养殖品种，具有适应性强、肉质优良等特点，是养殖户主要的经济来源^[1]。近年来，随着规模化养殖程度逐步提高，疫病防控压力也日益增大，尤其是混合感染性疾病，因病因复杂、症状不典型、死亡率高，给养殖户造成巨大的经济损失^[2]。

魏氏梭菌病是由产气荚膜梭菌引起的多种动物共患的急性传染病，该菌为革兰氏阳性厌氧芽孢杆菌，广泛存在于土壤、饲料、饮水及动物肠道中，当动物机体抵抗力下降时，芽孢可萌发并大量繁殖，产生多种毒素，引发急性中毒性疾病，临床多表现为急性死亡，剖检以肠管充血、红肿为典型特征^[3]。寄生虫病是肉牛养殖过程中极为常见的慢性疾病，其中体外蜱虫寄生的危害尤为突出。蜱虫不仅可通过吸食牛只血液来掠夺机体营养，还可作为媒介传播多种病原体，最终导致牛只出现营养不良、体质虚弱等问题，机体抵抗力也随之显著下降^[4]。冷应激作为重要的环境诱因，可破坏肉牛免疫功能和抗氧化功能，使免疫球蛋白G、白细胞介素-2等免疫指标显著降低，增加感染发病风险^[5]。在临床实践中，多病原混合感染现象较为普遍，是当前肉牛养殖过程中疫病防控工作的重点与难点。其中，关于魏氏梭菌与附红细胞体、肠道病毒等病原的混合感染案例在国内外相关研究中均有记载。由于此类混合感染中不同病原的致病机制相互交织，临床症状呈现叠加融合的态势，给疫病的早期诊断工作带来了极大的挑战，不仅容易引发临床误诊与漏诊情况，还会显著加重牛只的病情，最终致使群体发病率与死亡率大幅攀升^[6]。

2021年10月，某地部分养牛户发生肉牛急性猝死事件，发病急、死亡快，给养殖户带来严重的经济损失。本文通过系统调查该起疫情的发病情况、临床症状，结合病理剖检、实验室检测结果明确病因，制定并实施针对性综合防治措施，旨在阐明魏氏梭菌病与寄生虫病混合感染的发病机制及诱发因素，为肉牛养殖中此类混合感染性疾病的快速诊断、科学防控提供实践依据，同时为提升基层养殖户的疫病防控意识与科学养殖水平、降低养殖经济损失提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 主要仪器及试剂

Ⅱ级生物安全柜、显微镜、瑞氏-姬姆萨复合染色液（酶联生物）、革兰氏染色剂（赛默飞世尔科技公司）、洁净载玻片、涡旋混匀器。

1.2 发病情况

本次发病涉及3户养牛户（分别编号A、B、C），均饲养本地黄牛，采用传统放牧养殖模式，3户共饲养黄牛49头，其中A户养牛28头，B户养牛18头，C户养牛3头。养殖过程中，牛只白天放牧于草山草坡，晚上收回牛舍，不进行补饲，放牧期间无人看管。

疫情始于2021年10月8日，A户饲养的黄牛率先发病死亡，当日07:00死亡9头，10月9日又死亡2头；10月9日15:00，C户饲养的3头黄牛全部死亡；10月10日，B户饲养的黄牛出现死亡现象，上午死亡2头小母牛，下午死亡1头公牛。截至2021年10月10日，3户养牛户累计死亡黄牛17头，死亡率达34.69%。

1.3 研究方法

1）临床症状观察。记录发病及存活牛只的精神状态、体况、体温、眼结膜颜色及体表寄生虫寄生情况等临床表现。

2）病理剖检。对病死牛进行系统病理剖检，重点观察胸腔、腹腔、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胃肠道等器官的外观、颜色、质地及内容物情况，详细记录病变特征，剥离肠管病变组织送至贵定县兽医实验室开展后续检测。

3）实验室检测。血液样本检测：采集病死牛静脉血2 mL，滴加1滴于洁净载玻片中央，用推片以45°角匀速推制成薄血膜，自然晾干后分别采用姬姆萨染色法与瑞氏染色法染色，通过光学显微镜400倍物镜观察红细胞形态，1 000倍油镜下鉴定病原体。

肠管病变组织检测：取肠管病变组织（0.5 cm×0.5 cm），用生理盐水冲洗表面血迹后，刮取少量黏膜组织置于载玻片上，加1滴生理盐水研磨成匀浆制成压片；另取病变组织切面涂片，自然晾干后采用革兰氏染色法染色，分别在400倍物镜（压片）和1 000倍油镜（革兰氏染色标本）下观察细菌形态及染色特性。

4）病因分析。结合发病情况、临床症状、病理剖检结果、实验室检测数据及牧地环境（天气变化、放牧地植被类型等），综合分析疫情的主要病因、次要病因及诱发因素。

5）防治措施实施与效果监测。制定并实施病死牛无害化处理、寄生虫防控、魏氏梭菌病防控、营养补充及饲养管理优化等综合防治措施，定期监测存活牛只的体况、精神状态及死亡情况，评估措施防控效果。

2 结果与分析

2.1 临床症状

病死牛只无明显前期临床症状，多在日常行走途中突然倒地，病程进展极快，短时间内即发生死亡；临死前表现为剧烈惨叫、腹痛翻滚、四肢呈划水样乱蹬等反应。存活牛只普遍表现为体况消瘦，肋骨清晰可数，部分牛只甚至呈现极度营养不良状态。多数牛只体表可见大量蜱虫寄生，随机抽测1头发病母牛体温为38.6 ℃（处于正常范围），眼结膜呈特征性黄白色，未观察到发热、咳嗽、腹泻等其他明显异常临床症状。

2.2 病理剖检结果

对死亡牛只进行剖检发现，腹腔内有少量淡黄色清亮积液；胸腔无积液或黏连，肺淡红柔软，按压回弹快，切面干燥；心脏正常，心外膜光滑，心腔血液暗红凝固，心肌均匀；肝、脾、肾外观无肿大萎缩，表面光滑，切面清晰。3头病死牛小肠后段及结肠前段肠管充血脆弱易破，黏膜点斑状出血、部分脱落，肠腔含暗红色稀糊内容物；胃黏膜光滑，内容物为草渣与液体，胃壁无出血坏死。

2.3 实验室检查

1）血液样本检查。采集牛静脉血制成薄血膜，姬姆萨染色显示红细胞呈棘形或星形（图1），边缘有0.5~1.0 μm深色小点，为疑似附红细胞体；油镜下15%~20%红细胞内含梨形虫，大小2~3 μm，胞质淡蓝，核深红。瑞氏染色更清晰显示附红细胞体深蓝、梨形虫核鲜红，证实血液原虫感染。

2）肠管病变组织检查。取肠管病变组织（0.5 cm×0.5 cm），用生理盐水冲洗表面血迹后，刮取少量黏膜组织置于载玻片上，加1滴生理盐水研磨成匀浆，制成压片；另取病变组织切面涂片，自然晾干后采用革兰氏染色法染色。镜检结果：压片镜检（400倍物镜）可见黏膜组织中有大量细菌，呈单个或短链状排列；革兰氏染色标本（1 000倍油镜）中，可见大量革兰氏阳性大杆菌，菌体呈两端钝圆的杆状，大小（4~8） μm×（1.0~1.5） μm，部分菌体两端有芽孢，芽孢呈圆形或椭圆形，位于菌体中央或近端，符合魏氏梭菌（产气荚膜梭菌）的形态特征。

2.4 病因分析

1）主要病因。一是寄生虫混合感染，所有发病及存活牛只体表普遍有蜱虫寄生，蜱虫作为传播媒介，导致牛只感染附红细胞体、梨形虫等血液原虫^[7]；体外寄生虫的长期寄生，大量掠夺牛只营养，导致牛只极度消瘦、营养不良，机体抵抗力显著下降，为其他病原体的入侵创造了条件，形成“内忧外患”的病理状态^[8]。二是魏氏梭菌感染，长期干旱后突发降雨使放牧地环境湿度显著上升，利于魏氏梭菌增殖，牛只摄食被污染的牧草后，该菌在肠道内大量繁殖并产生毒素，引发急性中毒性疾病，导致牛快速死亡^[9]。

2）次要病因与诱因。冷应激刺激通常在牛只长期适应温暖且稳定的环境后出现，若突然遭遇降温、降雨等极端天气变化，当环境气温在短时间内急剧下降超过10 ℃时，其机体的稳态会被打破。这种强烈的应激会直接破坏牛只的免疫防御系统和抗氧化体系，致使免疫相关指标显著降低、机体代谢功能紊乱，而代谢紊乱又会进一步削弱免疫功能，形成恶性循环，最终使牛只的抗病能力大幅下降，成为疫病暴发的关键诱因^[5]。牛放牧于收割后稻田，采食含氰苷的再生禾本科幼苗，氰苷在体内可分解为氢氰酸，长期累积导致中毒，加速死亡^[10]；长时间晴天后突然降雨，反刍动物采食被雨水浸湿的牧草后易发低镁低钙血症，导致神经肌肉兴奋异常，引发抽搐、昏迷或猝死^[11]。

肉牛急性猝死由寄生虫感染致体虚，叠加魏氏梭菌、冷应激及氢氰酸累积、低镁低钙等多因素协同加速死亡，符合多病原混合感染与环境诱因致病特征^[6]。

2.5 诊断结果

根据发病情况、临床症状、病理剖检及实验室检查结果，结合牧地环境分析，确诊本次疫情为魏氏梭菌病与寄生虫病（附红细胞体病、梨形虫病）混合感染，并伴有冷应激、氢氰酸中毒风险、低镁低钙血症等多种因素诱发的急性猝死综合征。

2.6 治疗措施和效果

通过实施病死牛无害化处理、寄生虫防控、魏氏梭菌病防控、营养补充及饲养管理优化等综合措施，疫情得到有效控制。1周后无新增死亡病例，1个月后所有牛只均健康存活。

3 讨 论

3.1 混合感染的致病机制与防控难点

本次病例中，肉牛同时感染魏氏梭菌病和寄生虫病，且叠加多种诱因，凸显了混合感染性疾病的复杂性和危害性。寄生虫感染导致牛只体质虚弱、免疫功能下降，为魏氏梭菌的入侵和繁殖提供了有利条件；而魏氏梭菌感染引发的急性中毒又进一步加剧病情，形成“慢性损伤+急性中毒”的协同致病模式，导致高死亡率^[6]。混合感染疾病症状不典型，病因相互掩盖易致误诊和延误防控，多种因素增加防治难度。肉牛养殖需重视该病防控，加强监测并采取综合措施。

3.2 环境因素对疫病发生的关键影响

环境因素是本次疫病的重要诱因，冷应激尤为显著。研究发现，低温会降低肉牛的免疫球蛋白和白细胞介素-2等免疫指标，削弱抗氧化能力并升高丙二醛，导致抵抗力下降^[5]。本次疫情中，长期干旱后的突发降温降雨，不仅引发冷应激，还改变了放牧地湿度环境，利于魏氏梭菌增殖，同时增加了牛只采食被污染牧草和有毒植物再生苗的风险^[12]。养殖户应关注天气变化，提前修建牛棚、储备饲料以减少环境影响；同时，选择安全放牧场地，避免有毒植物和病原体污染区域。

3.3 科学养殖与疫病防控的核心关系

疫病与养殖模式和管理水平相关。传统放牧不补饲导致牛营养不足；放牧无人看管难以及时发现异常；缺乏驱虫免疫导致牛抵抗力下降易染病^[13]。推广科学养殖技术，提升饲养管理和疫病防控能力，是预防疫病的关键，应引导养殖户转变观念，推行科学补饲、定期驱虫、规范免疫的模式，强化管理，提高效益^[14]。

3.4 基层疫病防控体系建设的重要性

基层疫病防控体系是保障养殖业健康发展的重要基础。此次疫情暴发后，通过农业农村部门与专家团队的紧密协作，迅速明确致病原因并拟定防控举措，有效遏制了疫情扩散^[15]。该案例表明，强化基层疫病防控体系、提高兽医专业素养、建立快速诊断机制，对应对突发疫情、降低损失至关重要。同时应加强养殖户技术培训，形成“政府引导、专家支撑、养殖户参与”的防控格局^[16]。

4 结 论

某地肉牛急性猝死系魏氏梭菌病与寄生虫病混合感染，并受冷应激、中毒风险及营养缺乏等因素共同导致。通过无害化处理、驱虫防病、营养管理和饲养优化等综合措施，疫情得以控制。肉牛养殖应注重科学管理，加强疫病防控，关注环境变化，建立防控体系，以预防混合感染，保障产业健康发展。

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