猪病毒性肠炎是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)及猪轮状病毒A(PoRV)等多种病原体引发的高度接触性肠道传染病,给规模化养猪场带来巨大经济损失。近年来,随着养殖密度增加、跨区域调运频繁及养殖环境因素变化,已呈现频繁暴发、病原变异加速、混合感染增多等复杂严峻的流行态势
[1],导致该病的防控难度持续加大,因此,对诊疗技术的精准性、高效性与实用性提出了更高要求。
当前,猪病毒性肠炎诊疗技术虽然在实验室检测、临床治疗及预防控制等方面取得了一定进展,但仍面临病原变异应对滞后、基层检测能力薄弱、特效抗病毒药物匮乏、防控体系不完善等突出问题。猪病毒性肠炎诊疗技术的发展与应用不仅直接关系到养殖经济效益,更对促进行业可持续发展、保障公共卫生安全及维护产业链稳定具有重要意义。因此,本文系统梳理猪病毒性肠炎诊疗技术的发展现状,深入剖析现存问题,探索科学有效的优化对策,旨在构建科学高效的防控体系,降低疫病危害,保障养猪业健康发展。
1 猪病毒性肠炎诊疗技术现状
1.1 诊断技术
1)实验室精准检测技术。分子生物学检测技术已成为目前猪病毒性肠炎确诊的实验室检测核心手段,其中荧光定量PCR技术凭借高灵敏度、特异性及定量优势被广泛应用。该技术通过特异性探针设计,可实现对引起病毒性肠炎等多种病原的早期精准检测,不仅能区分感染阶段,还可量化病毒载量,从而评估感染程度,龚婷等
[2]建立了一种快速鉴别检测PEDV变异毒株的病原学方法,对PEDV变异毒株RNA的最低检测限达到0.74 ng,同时应用于洛阳市PEDV变异毒株的流行规律调查,发现近几年流行率基本持平、散养户流行情况较规模化猪场严重。同时,该技术已实现从单一病原检测向多种病原同步筛查的跨越,通过特异性荧光信号区分病原类型,可同时检测PEDV、TGEV、PDCoV及PoRV 4种腹泻病毒
[3],完全满足多病原混合感染诊断的防控需求,为疫情评估监测提供科学依据。目前,高灵敏度分子检测技术的研发也已取得新进展,基于CRISPR/Cas12a系统,将huLbCas12a与LAMP技术相结合,通过特异性向导RNA设计,构建并优化联合检测体系,可实现对PEDV、TGEV、PDCoV及PoRV 4种腹泻病变异株的单分子级检测,检测下限为1~10 copies/μL
[4]。
此外,病毒分离鉴定、间接免疫荧光、免疫组织化学法等实验室方法常因耗时较长、操作繁琐、技术受限等问题而无法用于快速诊断,酶联免疫吸附试验因操作简便、成本可控,常用于猪群抗体水平筛查与流行病学调查,但无法区分疫苗免疫与野毒感染,仍需进一步突破。
2)现场快速检测技术。由于猪病毒性肠炎发病突然,传播速度极快,可呈指数式暴发,基层养殖场对快速诊断技术的需求极大,从而推动了便携式检测方法的发展。胶体金试纸条是目前最常用的便携式检测技术,该方法以胶体金作为示踪标志物,通过渗滤或层析提高抗原抗体反应的效率,形成的红色胶体金条带肉眼即可辨别,也可用灰度仪测量,通过抗原纯化与标记技术改良提升检测灵敏度,已有针对PEDV、TGEV、PoRV的市售商品化胶体金检测试纸条,逐渐成为基层养殖场初步确诊的主流检测技术。
重组酶聚合酶等温扩增(RAA)与侧流层析试纸条(LFD)结合的RT-RAA-LFD技术也已在PEDV、PoRV检测中实现标准化应用,在37 ℃恒温条件下反应15 min即可完成检测,与传统RT-PCR检测总符合率达97.0%
[5-6],且无需复杂仪器,实现检测结果可视化,为基层现场快速筛查提供了新手段。
此外,华中农业大学团队研发的浮栅碳纳米管场效应晶体管(FG CNT-FET)便携式免疫传感器,成为当前检测PEDV的突破性技术
[7],该传感器通过特异性单克隆抗体与PEDV S蛋白的高亲和结合,可在1 min内完成检测,且能精准区分PEDV与PDCoV,无需复杂仪器,用于快速、灵敏、准确地识别PEDV,推动了养殖现场快速检测技术的进一步发展。
1.2 治疗技术
当前针对猪病毒性肠炎并无特效治疗药物,临床治疗仍以对症支持为主,西医治疗核心目标是预防脱水、防止继发感染和提供营养支持,中兽医以止痢泻火、清热解毒为治疗原则。及时纠正水盐代谢紊乱,控制细菌继发感染,改善肠道微生态平衡,促进肠黏膜修复,可有效降低死亡率。颜永群
[8]对确诊为TGEV感染的猪场进行诊疗及防控时,采取中西医结合治疗,以“消除炎症,清洁肠道,去除毒物,防止脱水”为原则,西医使用鞣酸蛋白、维生素B
12、5%葡萄糖盐水、蒙脱石散等药物,中药则使用黄连解毒汤加减方剂,有效控制了病情进一步发展。
此外,新型抗病毒药物研发取得突破,中国农业科学院兰州兽医研究所团队发现内质网应激诱导剂硫司加精(TG)在体外细胞培养、猪肠道类器官模型及活体仔猪试验中均表现出显著抗病毒效果,有效抑制TGEV复制,减轻肠道组织损伤,其作用机制与改善内质网相关蛋白降解、调控肠上皮细胞功能相关,为临床治疗提供了潜在候选药物
[9]。
2 猪病毒性肠炎诊疗技术现存问题
2.1 诊疗及时性
猪病毒性肠炎相关病毒多为单股正链RNA病毒,基因组结构不稳定,易发生碱基突变、片段重组等变异,且变异速度呈现加速态势,导致变异株持续出现。新型变异株出现后,现有检测方法可能因靶点序列不匹配,往往存在检测滞后期,从而导致诊断不及时,错过最佳治疗时机,而疫苗研发更难以实时跟进毒株变化,导致防控体系被动滞后。
2.2 检测准确性
针对猪病毒性肠炎的检测技术体系存在实验室技术难普及、现场快速检测技术不精准的结构性矛盾。一方面,实验室精准检测技术虽然具备高灵敏度与特异性,但操作要求较高,且对样品采集、保存与运输要求较为严格,检测结果缺乏统一标准,更容易受不同试剂及实验室检测方法的影响;另一方面,基层现场版快速检测技术虽然操作便捷,但检测灵敏度不足,假阳性率较高,易导致误诊误判,更无法准确诊断混合感染病例,且基层养殖场人员检测能力薄弱,可能导致检测结果偏差。
2.3 药物特效性
目前,临床治疗猪病毒性肠炎仍无特效抗病毒药物,仅以对症支持为主要治疗手段,中药治疗以辨证施治为核心,抗病毒靶向性较弱,难以从根本上抑制病毒复制,针对猪病毒性肠炎的专用抗病毒药物目前仍处于研发阶段,发现的潜在候选药物也尚未实现商品化生产,且在临床实践中,部分养殖场存在严重不规范的用药行为,盲目使用抗生素剂量,导致继发感染的治疗难度显著上升。
2.4 防控完善性
生物安全防控是疫病防控的第一道防线,病毒性肠炎传播途径复杂且速度较快,但多数养殖场生物安全意识薄弱,防控体系不完善。存在人员与车辆管控不严、消毒不全面彻底、饲养人员消毒意识薄弱、新引种猪隔离观察时间不足、病死猪无害化处理不规范等问题,从而导致外源病毒引入风险增加,猪群抵抗力下降,加剧疫情扩散风险。
3 猪病毒性肠炎诊疗技术优化措施
3.1 强化变异株检测技术快速适配
建立猪病毒性肠炎病原变异全覆盖监测网络,采用“分层抽样+重点跟踪”模式,每月采集规模化猪场、中小散户的粪便、血清样本,运用高通量测序技术开展PEDV、TGEV等腹泻病毒的基因测序与抗原性分析,实时追踪毒株变异趋势,明确流行基因型占比、关键抗原位点突变情况,每季度发布全国病原变异监测报告,建立基因组数据库,为检测技术优化与疫苗研发提供精准数据支撑。同时,设计覆盖传统毒株与变异株关键靶点的特异性引物、探针,实现对不同基因型毒株的同步检测与区分,例如,针对PEDV G1型与G2c型的S蛋白差异位点,优化多重RT-PCR试剂盒的引物设计,可同时检测2种基因型并量化病毒载量。利用CRISPR/Cas12a、CRISPR/Cas13a等新型分子技术,构建高灵敏度变异株检测平台,最低检出限达10 copies/μL,定期复核更新检测靶点序列,确保检测技术与流行毒株同步适配,实现新型变异株的早期预警。
3.2 提高检测准确性
1)推进检测技术标准化与规范化。关于猪病毒性肠炎检测的准确性,应制定国家标准并且及时与检测技术同频更新,国家标准制定时应考虑疾病流行区域差异性,尽可能扩大覆盖面,统一荧光定量PCR、ELISA、胶体金等检测方法的操作流程、试剂质量标准、结果判读阈值,明确试验样品采集、保存、运输的规范条件,检测时应首先使用国家检测标准,其次考虑地方检测标准,从而提高检测结果的可比性与可靠性。此外,可建立检测结果共享平台,基层养殖场、实验室的检测数据实时上传至区域疫病防控系统,为联防联控提供数据支持。同时,开展动物疫病检测实验室和检测机构的盲样检测考核,对不合格者进行技术培训与整改,确保检测及上传数据准确可信。
2)强化基层检测技术升级与培训。基层现场快速检测技术对于猪病毒性肠炎的及时诊疗具有重要意义,可重点优化胶体金试纸条、RT-RAA-LFD等现场检测技术的性能,通过抗原纯化、纳米标记等技术改良,实现胶体金试纸条对病原的检测灵敏度大幅度提升,假阳性率控制在3%以下,也可实现RT-RAA-LFD技术用于粪便样本直接检测,降低基层操作难度。同时,检测技术专家定期通过现场实操培训、线上课程教学等方式,向基层养殖人员传授快速检测技术的操作规范、结果判读方法及常见问题处理技巧,实现基层检测便捷化与准确化。
3.3 加速特效抗病毒药物研发与应用
在深入研究病毒致病机制的基础上,针对其入侵增殖的关键环节,筛选靶向药物靶点,加速新型抗病毒药物的研发,推进内质网应激诱导剂硫司加精(TG)、植物源抗病毒成分等潜在药物的临床试验,探索中西医结合绿色治疗模式,以及与肠道黏膜保护剂、免疫增强剂的联合用药方案,提高治疗效果。翟崇凯等
[10]已证明增强型氯硝柳胺纳米药物在体内外均表现出良好的抗PEDV活性,为其临床转化提供了理论基础;Zhang等
[11]研究结果证明,双苄基异喹啉包括小檗胺等生物碱类小檗碱是有效的抗PEDV天然产物,并可能成为新型抗病毒药物。此外,豌豆活性肽可通过抑制内质网氧化还原酶的表达而抑制PEDV复制,是一种新型抗PEDV小分子物质
[12]。目前,关于抗腹泻病毒药物的报道很多,但大多数处于实验室研究阶段或小型测试阶段,需加速推进临床应用。
3.4 强化生物安全防控与饲养管理
养殖场疾病防控均以生物安全为核心,构建全方位防控体系,猪病毒性肠炎的防控也不例外。具体如下:
1)场区布局与分区管控。覆盖人员、车辆、物资、引种、消毒、废弃物六大关键环节。使用物理隔离带、双道消毒门严格划分清洁区、污染区、缓冲区,生产区内部实行单元化管理,同时场区大门入口配置车辆洗消设备、人员消毒通道、物资消毒间,生产车间入口配置脚踏消毒池、手部消毒器、更衣柜。
2)人员与车辆管控。严禁非必要场外人员与车辆入场,生产区工作人员禁止外出,返场后需执行消毒、淋浴、更衣、隔离等流程,才可进入生产区。车辆应根据分类进行路线管控,且必须执行清洗、消毒、烘干的洗消标准流程。
3)物资与饲料管控。所有进场物资必须经过缓冲区物资消毒间的严格消毒,禁止直接进入生产区,成品饲料由场内专用饲料车转运至各生产单元,转运车辆每日消毒,禁止场外人员直接转运。
4)猪群引种与检疫。优先选择场内自繁自养,减少引种次数,如确需引种必须从具有《种畜禽生产经营许可证》《动物防疫条件合格证》的正规种猪场引种,且必须经过隔离观察确认健康。
5)疫病监测与消毒。注重全场猪群的日常临床症状监测和实验室检测,建立猪群健康档案,制定科学的消毒计划,标准化消毒流程,根据消毒目的选择不同类型的消毒剂,且定期轮换使用。
6)病死猪与废弃物处理。建立疫情应急预案,一旦发现腹泻病例,立即隔离发病猪群,开展快速检测确诊及消毒,对病死猪及污染物进行集中无害化处理,防止疫情扩散蔓延。
7)精细化饲养管理体系。针对不同生长阶段的猪群,制定个性化的饲养管理方案,根据日龄、体重、健康状况进行精准分群与密度控制,保证每个阶段猪群摄入营养成分充足全价,确保营养均衡,采用定时、定量、定点的投喂原则,保证猪群的采食规律。
4 结 语
猪病毒性肠炎作为制约养猪业健康发展的重大综合性疫病,诊疗技术直接关系到养殖效益、行业发展、公共卫生安全等多个维度。
未来仍需通过多种精准策略促使诊疗技术精准化、快速化、绿色化,从而有效降低疫情暴发风险,减少经济损失,为养猪业健康可持续发展提供坚实保障。