犊牛大肠杆菌病的诊断与治疗

摘要

初生犊牛免疫力低下易感染致病性大肠杆菌、发病死亡率高，给养牛业造成重大经济损失。为有效防控该病，本文系统分析了该病的流行病学特征、临床症状、现场快速诊断与实验室诊断方法，针对不同临床类型提出了针对性的中西药治疗方案，并阐述了以中草药制剂、微生态制剂为主的绿色防控措施，为犊牛大肠杆菌病的科学防控、精准诊疗及养牛业绿色可持续发展提供重要保障。

关键词

犊牛 / 大肠杆菌病 / 诊断 / 治疗方法

犊牛大肠杆菌病是养殖中较为常见的急性传染病，患病犊牛表现为腹泻、脱水、败血症等症状，阻碍犊牛生长发育，严重时导致死亡，给养殖户造成经济损失^[1]。由于新生犊牛消化系统与免疫系统发育未完善、体温调节能力差，导致自身免疫力低下，易受到饲养环境、营养调控、应激刺激等因素的影响而患病。该病防治中，抗生素曾广泛应用，但长期滥用致耐药性突出。2020年我国禁止抗生素作为饲料添加剂，相关数据显示，我国及多个国家牛源大肠杆菌四环素耐药率超过50%，青霉素耐药率达90%^[2]。在此背景下，推动“减抗、替抗”绿色养殖已成为行业共识。本文系统综述犊牛大肠杆菌病的流行病学、诊断方法及治疗方案，以期为该病的科学防控、保障犊牛健康及养牛业可持续发展提供理论依据与技术参考。

1 流行病学

1.1 病原学特征

犊牛大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起，该菌隶属于肠杆菌科的埃希氏菌属，为革兰氏阴性菌，具有鞭毛构造，能在液体环境中自由游动。该菌含有O、K、H 3种主要抗原成分，血清型由3种抗原组合决定，因此血清型复杂多样。依据其毒力因子及临床症状，致病性大肠杆菌主要分为肠道致病性大肠杆菌、肠道出血性大肠杆菌、肠道产毒素性大肠杆菌等。其毒力因子种类丰富，主要包括黏附素（包括F4、F5、F6、F17、F18等）、肠毒素（耐热型与不耐热型）、志贺素（分为Stx1、Stx2）、α-溶血素及毒力岛等^[2]。

1.2 易感动物及传播途径

犊牛大肠杆菌病可感染各品种、各年龄阶段牛只，年龄越小的犊牛感染性越强、死亡率较高，1周龄内的犊牛最易感，其发病率和死亡率分别为30%~50%和20%以上，成年牛多为隐性带菌，无明显临床症状^[3]。该病的传染源主要为患病牛、带菌牛；传播媒介有含大量致病菌的粪便、被污染的饮水及饲草料等。传播途径主要包括消化道、脐带以及产道，例如母牛携带致病菌时，犊牛吮吸母乳可经消化道感染发病^[3]。

1.3 流行特点

犊牛大肠杆菌病一年四季均可发病，其中夏季、春冬季发病率较高。夏季天气炎热，饲草料易腐败变质，若管理不当易增加间接感染风险；春冬季气温较低，犊牛易受冷应激影响导致抵抗力下降，且低温环境利于病原存活与传播，从而增加发病率。最新流行病学数据显示，该病在我国主要养牛区呈地方性流行。王栋^[4]调查显示，宁夏地区规模化牛场犊牛腹泻年均发病率达22.53%，冬季和初春为高发期，病原以轮状病毒和大肠杆菌为主，混合感染率可达30%以上。孔祥鹤^[2]研究发现，黑龙江省犊牛腹泻样本中致病性大肠杆菌阳性率为74.33%，地域分布上鸡西市（87.5%）显著高于大庆市（75.33%），季节分布上春季分离率（71.3%）显著高于其他季节。

2 临床症状

根据临床表现，犊牛大肠杆菌感染可分为不同类型，各类型症状具有典型特征，具体如下.

2.1 败血型

该型多发生于出生3 d左右、未能及时吮吸初乳的犊牛，死亡率最高。患病犊牛体温迅速升高至40 ℃，表现为食欲不振，行动缓慢，伴随腹泻症状，粪便初期为淡黄色水样、气味酸臭（形态呈蛋花汤状），后期逐渐转变为灰白色、夹杂血丝的稀粪。部分患病牛出现腹痛症状，继发胸膜炎、肺炎或者骨关节炎，病程后期会出现呼吸衰竭、肌肉震颤等症状，若未及时治疗，易导致犊牛死亡^[5]。

2.2 肠炎型

该型又称为白痢型，以腹痛、下痢为主要特征，患病犊牛体温先升高后下降。粪便初期为黄色、带有恶臭的稀粪，随后转变为灰白色、含气泡、血丝及血凝块的半液体状，且气味酸臭，粪便附着于犊牛肛门、尾部以及后肢。表现为机体消瘦、黏膜苍白、眼眶下陷等症状，病情加重后会发生脱水，因过度虚弱无法站立，病程持续恶化会造成机体严重衰竭，继发肺部感染后极易死亡^[5]。

2.3 肠毒血型

该型发病率较低，但猝死概率较高。急性型病例可导致犊牛突然死亡。慢性型病程较长，患病犊牛表现为兴奋不安、严重腹泻，粪便呈白色且夹杂较多泡沫，随着病情进展，逐渐出现昏迷、抑郁等神经症状，最终可导致犊牛死亡^[5]。

3 诊断方法

3.1 现场快速诊断

现场快速诊断可采用胶体金免疫层析试纸条，该方法操作简便、快速，适用于基层养殖场日常诊断及紧急筛查。检测样本选用新鲜粪便或直肠拭子，将样本适当稀释后滴加至试纸条加样孔，静置后进行结果判读：若质控线（C线）与检测线（T线）均出现显色色带，提示检测结果为阳性，表明犊牛已感染致病性大肠杆菌^[6]。

3.2 实验室诊断

1）染色镜检。此方法为该病的初步实验室诊断手段，操作流程如下：首先在无菌环境下采集死亡犊牛内脏组织、粪便作为样本，将样本制成涂片后进行革兰氏染色，染色完成后置于显微镜下观察。若镜检发现革兰氏阴性、两端钝圆、无芽孢的杆菌，常规革兰氏染色下不易观察到鞭毛，结合临床症状可初步判断为大肠杆菌感染^[7]。

2）细菌分离培养。无菌采集可疑牛只血液、肝脏或脾脏组织，接种于血液琼脂平板，分别置于有氧与厌氧恒温培养箱中培养24 h，2种条件下平板上均长出浅灰色、透明、光滑的菌落，菌落周围呈β型溶血，表明大肠杆菌在需氧与厌氧条件下均可生长。接着，分别挑取可疑菌落接种于麦康凯琼脂培养基和伊红美蓝培养基，37 ℃培养24 h后，麦康凯琼脂培养基上形成红色、圆形、边缘整齐且光滑的菌落；伊红美蓝培养基上形成深色、带有金属荧光的菌落。最后，挑取可疑菌落涂片革兰氏染色，可见革兰氏阴性、呈红色或者粉红色，两端钝圆，大小中等、无荚膜的杆状菌体，鉴定为大肠杆菌^[6]。

3）分子生物学鉴定。该方法灵敏度高、特异性强、检测速度快，可在极低浓度下检测到目标DNA片段。操作步骤如下：挑取单个可疑菌落，采用DNA提取试剂盒提取DNA；随后进行PCR扩增，采用优化后的PCR反应体系与程序（典型退火温度50~65 ℃，循环次数25~40次），扩增前需经特异性与敏感性验证以保证可靠性；最后对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察DNA条带与预期大小的相符程度^[8]。PCR技术是多重PCR、实时荧光定量PCR（qPCR）的基础，这些技术可显著提高检测效率与灵敏度，同时还能鉴别多种致病性大肠杆菌血清型。

4 治疗方案

4.1 败血型

方案一：西药治疗。以抗菌消炎、增强免疫力为治疗原则。按患病牛只体重，肌内注射硫酸头孢喹肟注射液（规格为10 mL∶0.25 g），剂量为 1 mg/kg，每日1次，连用3 d；或肌内注射硫酸阿米卡星注射液（规格为2 mL∶0.1 g），剂量为 10 mg/kg，每日1次，连用5 d；同时配合静脉注射氟尼辛葡甲胺注射液（规格为10 mL∶0.5 g），剂量为0.4 mL/10 kg，每日1次，连用3 d^[9]。

方案二：中药治疗。选用白头翁15 g、葛根15 g、黄柏12 g、秦皮12 g、黄连9 g、黄芩9 g、甘草6 g，加水慢火煎煮，过滤取汁，晾凉灌服，每日1剂，连用7 d。以上为单头犊牛日用量^[9]。

4.2 肠炎型

方案一：西药治疗。以保护胃肠黏膜、调整胃肠道功能为原则。取乳酸2 g、鱼石脂20 g，加100 mL水混合均匀后灌服，每次灌服50 mL，每日2次，连用5 d，以保护犊牛胃肠道黏膜^[8]。

方案二：中药治疗。取人参、煅龙骨、煅牡蛎、白芍、制附子、炙甘草各15 g。煎煮时，人参文火另煎取浓汁以保留药效，制附子先煎3 h以降低毒性，煅龙骨、煅牡蛎先煎30 min，利于形成止泻保护膜，其余药物常规煎煮，混合药液后候温灌服，每日1剂，连用5 d，以上为单头犊牛日用量^[9]。

4.3 肠毒血型

方案一：西药治疗。以补液、预防感染、避免脱水为治疗原则。将葡萄糖粉20 g、氯化钠2 g、碳酸氢钠2 g、氯化钾2 g溶于1 000 mL温水中，供犊牛自由饮用；若犊牛无法自主饮水，需静脉滴注乳酸林格氏液（规格：250 mL）50~100 mL/kg、碳酸氢钠注射液（规格：10 mL∶0.5g）5 mL/kg，每日1次，连用5 d。同时肌内注射注射用头孢噻呋钠2.2 mg/kg，每日1次，连用5 d以控制继发感染^[10]。

方案二：中药治疗。取车前子25 g、肉豆蔻25 g、附子20 g、肉桂20 g、郁金20 g、诃子10 g、乌梅10 g，黄连6 g、姜黄6 g，加生姜为药引，水煎取汁候温灌服，每日1次，连用5 d，以上为单头犊牛日用量^[11]。

5 绿色替抗方案

西药治疗犊牛大肠杆菌病虽见效快、操作简单，但长期滥用易引发细菌耐药性问题，因此推行绿色替抗方案。其一，中草药制剂，该类制剂在犊牛腹泻临床防治中效果突出。研究证实，辣木叶、穿心莲、肿节风复方发酵液对大肠杆菌有显著抑制作用，能够有效降低小鼠腹泻率和死亡率，减轻肠道黏膜损伤，兼具预防和治疗双重功效，该复方发酵液应用于犊牛时，可有效降低腹泻率和死亡率。莘余等^[12]研究发现，在奶牛饲粮中添加葛根多糖，试验第28 天，对照组犊牛腹泻率为5.36%，而添加组犊牛无腹泻现象，说明葛根多糖可有效预防犊牛腹泻。其二，微生态制剂，多用于犊牛患病恢复期及日常饲养保健，添加乳酸菌、芽孢杆菌等益生菌，可竞争性抑制致病菌，修复肠道屏障。吴妍妍^[13]研究结果表明，每日按2 g/头的剂量给犊牛饲喂复合微生态制剂（嗜酸乳杆菌∶枯草芽孢杆菌∶酵母菌=3∶3∶1），可以有效预防因大肠杆菌K99导致的犊牛腹泻，同时提升犊牛生产性能。

6 结 语

犊牛大肠杆菌病是犊牛养殖阶段高发且危害严重的常见传染病，直接影响犊牛健康与正常生长发育。实际养殖中，通过熟练掌握该病的规范诊断技术与针对性治疗方案，做到早发现、早确诊、早治疗，才能最大限度降低病死率。后续研究需进一步加强病原流行病学监测与细菌耐药性动态评估，持续深化绿色替抗技术研发与应用，加快构建以“减抗、替抗” 为核心的综合防控体系，实现犊牛大肠杆菌病科学有效防控，保障养牛业健康可持续发展。

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