随着全球现代养禽业向集约化、规模化方向快速发展,家禽病毒性传染病已成为制约产业发展的重大障碍。禽脑脊髓炎自1930年首次在美国雏鸡中被发现以来,已经不断蔓延至世界各地
[1],给种鸡养殖业带来严重的经济损失。该病在4周龄以内的雏鸡中发病率可达60%,病死率高达70%
[2]。当前,疫苗免疫是防控禽脑脊髓炎的核心手段,但免疫效果不佳,疫情时有发生。因此,优化种鸡群疫苗免疫防控技术,建立科学完善的综合防控体系,对降低禽脑脊髓炎的发病率、减少养禽业损失具有重要的理论与实践意义。本文介绍禽脑脊髓炎的病原特性与流行规律,重点阐述其诊断要点与种鸡群的疫苗免疫防控策略,以期为该病的科学防控提供系统参考。
1 病原学
禽脑脊髓炎病毒属于小RNA病毒科、震颤病毒属,是单股正链RNA病毒,不含囊膜,病毒粒子呈二十面体对称结构,直径为24~28 nm
[3]。
禽脑脊髓炎病毒对氯仿、乙醚等脂溶剂不敏感,耐酸、耐胃蛋白酶及脱氧核糖核酸酶,在50 ℃、1 mol/L的氯化铵溶液中仍可保持稳定。但该病毒对高温敏感,经56 ℃加热30 min可使其感染力显著下降,100 ℃煮沸5 min可彻底杀灭病毒。此外,禽脑脊髓炎病毒在鸡粪等有机物中可存活4周,在干燥环境的粪便中传染性可维持数月。
2 流行病学
禽脑脊髓炎的自然易感宿主主要为鸡,不同品种、日龄的鸡均具有易感性,尤其是3周龄以内的雏鸡易感性最高;就生产类型而言,蛋鸡的发病率相对较高。除鸡之外,雉鸡、火鸡、鹌鹑、珍珠鸡等其他禽类也可发生自然感染。该病的传染源为临床发病禽与隐性带毒禽,传播途径包括垂直传播和水平传播,其中垂直传播是主要途径。垂直传播:禽脑脊髓炎病毒可感染产蛋鸡的卵巢组织,并在卵黄中增殖,产蛋鸡感染后3周内产出的种蛋均携带病毒。带毒种蛋部分会在孵化后期死亡;另一部分可正常孵化出壳,通常在出壳后1~7日龄内出现临床症状,也可能在20日龄左右才发病。水平传播:感染禽通过粪便将病毒排出体外,污染饲料、饮水、垫料及环境,易感鸡接触被污染的环境或采食被污染的饲料、饮水,经消化道感染。此外,被污染的衣物、运输车辆和器具的交叉使用,也可导致病毒的传播。
禽脑脊髓炎的流行无明显季节性,一年四季均可发生,但在冬春季节发病率相对较高,这可能与气温较低时养殖环境密闭、通风不良,导致病毒易在鸡群内聚集传播有关;部分地区在夏末秋初的高温高湿季节也会出现发病高峰。近年来,禽脑脊髓炎的疫情呈现出上升趋势
[4],尤其是陕西省和山东省的发病率较高,超过35%
[5]。
3 临床症状
禽脑脊髓炎的临床症状与患病鸡年龄相关,雏鸡和成年鸡的感染症状差异显著。
3.1 雏 鸡
雏鸡通常在1~3周龄发病,其潜伏期因传播途径而异:经垂直传播感染的雏鸡潜伏期较短,为1~7 d;经水平传播感染的雏鸡潜伏期较长,为10~30 d。根据病程进展,可分为初期、中期与后期三个阶段。
发病初期,病雏精神沉郁、嗜睡,对外界刺激反应敏感,易惊,部分雏鸡出现轻微的行走不稳。随着病情发展至中期,病雏站立不稳,行走时左右摇晃,还常以跗关节着地行走,头颈部震颤,受到惊扰时震颤加剧,这是禽脑脊髓炎雏鸡的典型症状之一,部分病雏出现双腿麻痹。后期,病雏因严重麻痹无法采食与饮水,逐渐出现消瘦、脱水、衰竭等症状,部分存活的雏鸡一侧或两侧眼睛的晶状体混浊、失明,最终因衰竭死亡,病程一般为5~7 d。
3.2 成年鸡
4周龄以上的育成鸡与成年鸡在感染禽脑脊髓炎病毒后,通常不表现明显的临床症状。
产蛋鸡感染后1~2周内出现产蛋率下降,下降幅度为5%~15%,严重时可达40%,产蛋曲线呈“V”型变化;种蛋孵化率下降5%~10%,毛蛋率与弱雏率升高。产蛋下降持续1~2周后,产蛋率可逐渐恢复至正常水平。
4 病理变化
剖检病死雏鸡,可见脑组织充血、水肿,质地变软,部分病鸡的大脑、小脑表面可见针尖大小的出血点。肌胃肌层内出现细小灰白区,直径1~2 mm,分布较为分散,需要仔细观察才能发现,该病变在病程中期的病雏中较为明显,为该病的特征性病变,可作为临床初步诊断的重要参考依据。成年鸡感染后,剖检无明显肉眼可见的病变。
5 实验室检测
禽脑脊髓炎的诊断需结合临床症状和病理变化做出初步诊断,而后通过实验室检测进行确诊。常用的实验室检测方法有病毒分离鉴定、血清学检测(酶联免疫吸附试验、中和试验)和分子生物学检测(PCR),其中病毒分离鉴定是本病诊断的金标准。检测方法及其优缺点对比详见
表1。
5.1 病毒分离鉴定
病毒分离鉴定是诊断禽脑脊髓炎的经典方法。采集出现典型症状的可疑病雏的脑组织、胰腺或肠道组织,将组织样本用无菌器械剪碎、研磨,并加入含有抗生素的生理盐水,制成悬液,离心后取上清液用于接种。通过卵黄囊接种5~7日龄SPF鸡胚或无禽脑脊髓炎母源抗体的易感鸡胚,每胚接种0.2~0.5 mL。接种后鸡胚置于37 ℃孵化器中培养,观察鸡胚发育情况,是否出现胚胎萎缩、爪卷曲、肌营养不良等特征性病变,若野毒株盲传4代后仍无病变,则判定为阴性;反之为阳性。病毒可通过血清中和试验、免疫荧光技术等进行鉴定。
5.2 血清学检测
血清学检测常用方法包括ELISA和血清中和试验。采集病鸡血液2~3 mL,水平静置1~2 h,或在37 ℃温箱中放置30~60 min,让其自然凝固析出血清;也可以通过离心,将血清分离后进行检测。
ELISA具有快速、灵敏、特异性高和可批量检测等优点,使用商品化的禽脑脊髓炎ELISA试剂盒,可检测血清中的禽脑脊髓炎病毒或特异性IgG抗体。吕转平等
[6]建立了间接ELISA方法,可用于养殖过程中免疫抗体和野毒感染抗体的检测和筛查。中和试验准确性较高,但操作繁琐、耗时较长,适用于实验室精准检测。该方法不仅可用于病毒鉴定与毒力检测,还可用于定量检测血清中抗体的中和活性,评估免疫效果。黄小洁等
[7]制备了禽脑脊髓炎病毒的单克隆抗体,可用于ELISA和中和试验,为后续免疫学诊断方法的建立奠定了基础。
5.3 分子生物学检测
分子生物学检测技术具有快速、精准和特异性高的优点,通过检测样品中的病毒核酸,可以检出微量病原,适用于禽脑脊髓炎的早期诊断与病毒分型。检测样品的采集与处理方法同病毒分离鉴定。常用的分子生物学检测方法包括逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)及全基因组测序。张孟迪等
[8]建立了Luminex xTAG检测方法,适用于快速检测,灵敏度可达1×10
2 copies/μL,批内和批间重复性试验的变异系数均在4.0%以下,具有良好的可重复性。谢志勤等
[9]建立了微滴式数字PCR定量检测方法,具有较高的特异性和灵敏度,最低检测限为5.9 copies/μL,且与其他病原无交叉反应。
6 防控措施
实施科学的疫苗免疫是防控禽脑脊髓炎的核心措施,其中种鸡群的疫苗免疫是阻断垂直传播、保护雏鸡的关键。在此基础上,加强生物安全管理可进一步巩固防控效果。
6.1 种鸡群疫苗免疫防控技术
种鸡群免疫的核心目标是产生高滴度的特异性抗体,通过垂直传递为雏鸡提供母源抗体保护,同时防止种鸡群感染后出现产蛋下降。
1)疫苗种类选择。目前可以用于禽脑脊髓炎防控的疫苗主要分为弱毒活疫苗与灭活疫苗两大类。弱毒活疫苗常用毒株有1143株、VR株等,可通过饮水、滴鼻、点眼等途径接种。该类疫苗具有较强的免疫原性,可以快速产生抗体、免疫期长,而且成本低;通常在接种后1~2周即可产生特异性抗体,一次接种终身免疫。但弱毒活疫苗对1日龄雏鸡有一定毒力,有病毒扩散风险,因此不能用于雏鸡免疫。油乳剂灭活疫苗常用毒株为VR株,通过肌肉注射或皮下注射接种。此类疫苗不仅安全性高,接种后不会引起病毒扩散,而且在免疫后还可以产生较高的抗体滴度,免疫效果稳定。灭活疫苗的免疫期通常只有6~8个月,成本较高;接种后2~3周产生有效抗体,抗体产生较慢,需要配合弱毒活疫苗进行基础免疫。目前市场上还有一些联苗,如脑痘二联活疫苗
[10]、新支减脑四联灭活疫苗等,可同时防控禽脑脊髓炎与其他疫病,具有简化免疫程序、降低养殖成本的优点。但联苗的免疫效果可能受其他疫苗成分的干扰,感染压力较高的养殖场建议使用单苗免疫。禽脑脊髓炎常见疫苗种类及优缺点对比见
表2。
2)科学免疫程序制定。通常在鸡群10~12周龄时,使用禽脑脊髓炎弱毒活疫苗进行基础免疫;18~20周龄时使用禽脑脊髓炎油乳剂灭活疫苗进行强化免疫。该程序可使种鸡在产蛋期产生高滴度抗体,为雏鸡提供有效的母源抗体保护。对于感染压力较高的养殖场,要适当提前接种时间,在8~10周龄时,使用禽脑脊髓炎弱毒活疫苗进行首次基础免疫;14~16周龄时,使用禽脑脊髓炎弱毒活疫苗进行二次基础免疫;开产前4周,使用禽脑脊髓炎油乳剂灭活疫苗进行强化免疫。对于产蛋期较长的种鸡群,可在40~45周龄时追加一次禽脑脊髓炎灭活疫苗免疫,以维持抗体水平。免疫程序及其适用条件见
表3。
3)免疫效果评估。分别在弱毒活疫苗基础免疫后和灭活疫苗强化免疫后的21 d,以及产蛋高峰期和产蛋后期使用ELISA或血清中和试验进行抗体水平检测,每次随机抽取10~20只鸡的血清样本。ELISA检测中抗体滴度≥1∶160,或中和试验中抗体效价≥1∶80,判定为抗体阳性,抽检的抗体阳性率达到80%(种鸡的阳性率应达到85%)则为免疫合格。此外,还需按照1%~2%的比例随机抽取种蛋孵化后1日龄雏鸡的血清,检测母源抗体水平。ELISA检测母源抗体滴度≥1∶40为抗体阳性,阳性率达到80%判定为母源抗体整体合格。
6.2 生物安全管理
1)严控引种。避免从疫区或有禽脑脊髓炎发病史的养殖场引进种鸡和种蛋。引进种鸡时,需进行血清学检测,确保禽脑脊髓炎病毒抗原阴性;引进后隔离饲养至少30 d,确认无感染后再混入大群饲养。
2)净化环境。建立严格的消毒制度,定期对鸡舍、地面、设备和器具等进行全面消毒
[11]。推荐使用0.2%~0.3%的过氧乙酸、0.05%的次氯酸钠等高效消毒剂,每周至少消毒2~3次。鸡群出栏后应进行空舍消毒,清洁消毒后空置1~2周方可引入新鸡。由于禽脑脊髓炎病毒对环境的抵抗力较强,消毒时需确保消毒剂有足够的浓度和作用时间,以保证消毒效果。同时,加强人员车辆管理:养殖人员进入生产区需更换衣物,经消毒池消毒后进入;外来人员和车辆严禁进入生产区,必要时需经严格消毒。
3)强化管理。实行全进全出的饲养模式,避免不同日龄的鸡群混养。保持鸡舍内空气新鲜,降低有害气体浓度,合理控制饲养密度,保证饲料营养均衡。
7 结语与展望
禽脑脊髓炎对鸡群的危害严重,虽然当前已有商品化疫苗用于预防,但由于病毒持续变异,疫苗所用毒株和临床流行毒株之间存在差异,导致疫苗的保护效力不足,疫情呈上升趋势。
近年来,随着分子生物学技术的发展,禽脑脊髓炎的诊断方法已实现精准化、快速化,为疫情的早期发现与监测提供了有力支撑。同时,对禽脑脊髓炎病毒的基因组特征与变异规律的研究不断深入,为疫苗株的更新与优化提供了科学依据。未来,防控禽脑脊髓炎应坚持综合防控理念,进一步加强病毒变异监测、新型疫苗研发及防控技术推广,不断完善综合防控体系。