猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型混合感染的诊断与防控

Diagnosis, prevention and control of mixed infection of porcine reproductive and respiratory syndrome and porcine circovirus type 2

摘要

目的 为确诊某养猪场发生仔猪体温升高、精神沉郁、咳嗽，甚至死亡的发病原因。 方法 对猪场开展流行病学调查，剖检发病仔猪，观察组织病理变化，并且采集病料应用RT-PCR和PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型病原。 结果 流行病学调查发现，该养猪场从多个养殖户购买仔猪混养，未及时进行药物保健和疫苗接种，生物安全措施不完善。发病仔猪表现为体温升高、精神沉郁、食欲不振、咳嗽、被毛粗乱、腹股沟淋巴结肿大等症状；剖检发病仔猪，病理变化主要为肺部间质性肺炎，肺脏出血瘀血，尖叶、心叶呈暗红色，有坏死和肉变；腹股沟淋巴结和肠系膜淋巴结出血、肿大明显。实验室应用猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型的特异性引物进行RT-PCR和PCR扩增检测病原均为阳性。 结论 综合分析确诊为仔猪混合感染猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型疾病，养猪场迅速采取加强饲养管理、药物防治和疫苗紧急免疫接种等综合防控措施，猪群的发病状况得到有效控制。

Abstract

Objectives A disease in a pig farm that causes piglets to have fever, depression, coughing and even death was diagnosed to be well prevented and controlled. Methods Epidemiological investigation was conducted on the pig farm with infected piglets. The infected piglets were dissected to observe the histopathological changes in tissues. The disease materials were collected to detect porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) and porcine circovirus type 2 pathogens with RT-PCR and PCR. Results The pig farm purchased piglets from multiple farmers and raised them together, but did not provide timely medical care and vaccination, and the measures for biological safety were incomplete. The affected piglets had symptoms including fever, depression, decreased feed intake, cough, disheveled coat, and swollen inguinal lymph nodes. The pathological changes of the diseased piglets at autopsy were mainly interstitial pneumonia in the lungs, pulmonary hemorrhage and blood stasis, dark red apex and heart lobes, necrosis, and flesh degeneration. The bleeding and enlargement of inguinal lymph nodes and mesenteric lymph nodes were obvious. were used for, Both of the RT-PCR and PCR amplification with specific primers for PRRS and porcine circovirus type 2 to detect the pathogen were positive. Conclusions Comprehensive analysis confirmed that piglets were mixed infected with PRRS and porcine circovirus type 2 disease. The pig farms should quickly adopt comprehensive measures of prevention and control including strengthening the management of farming, prevention with drug and immunization with emergency vaccine to effectively control the disease in the pig herds.

Graphical abstract

关键词

猪繁殖与呼吸综合征 / 猪圆环病毒2型 / 混合感染 / 疫苗免疫

Key words

porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) / porcine circovirus type 2 / mixed infection / immunization with vaccine

近年来，猪的疫病日趋复杂，并且混合感染也越来越普遍，尤其是PRRSV、PCV-2混合感染最为严重^[1-3]。猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS），以妊娠母猪繁殖障碍、仔猪呼吸困难、发病率高为主要特征^[4]；猪圆环病毒2型是危害猪群健康的重要疾病之一，具有空气传播、垂直传播、持续感染、亚临床感染、继发感染和免疫抑制等特点^[5-6]。断奶仔猪最易发生猪圆环病毒2型与其他疾病混合或者继发感染，其中PRRSV与PCV-2混合感染会使IL-10（白介素10）大量表达，引起炎症反应、免疫系统紊乱、机体免疫抑制，增加其他细菌或病毒感染的几率，死亡率增加^[7-8]，对养猪业造成严重的经济损失。本文结合2025年10月某养猪场猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型混合感染的诊断和综合防控，特别是应用高品质疫苗进行免疫接种取得较好的防控效果，以期为猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型疫病防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 病料及主要试剂

采集发病仔猪的肺脏和腹股沟淋巴结组织样品；猪圆环病毒2型灭活疫苗、猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗均为杭州佑本动物疫苗有限公司生产；MinBESTViral DNA/RNA Extraction Kit Ver.5.0核酸提取试剂盒、1 st Strand cDNA反转录试剂盒均购自TaKaRa公司。参照GenBank中公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因和猪圆环病毒2型Cap基因序列，利用Primer Premier 5.0软件分别设计引物，设计的特异性引物委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成，预扩增片段依次为500、375 bp。

1.2 流行病学调查

对猪群的来源、饲养环境、发病时间、临床症状、猪场生物安全控制措施及疫苗免疫接种情况展开全面调查，分析发病原因，排除不可能感染的疾病。剖检发病仔猪，观察其肺脏、心脏、脾脏、肾脏、肠系膜淋巴结和腹股沟淋巴结的病理变化。

1.3 实验室病原检测

将预先称重的发病仔猪肺脏和腹股沟淋巴结组织样品分别剪碎，研磨成糊状，加入2倍组织重量的无菌PBS缓冲液，充分混匀，-70 ℃反复冻融3次，置4 ℃、3 500 r/min离心10 min，取上清备用。按照病毒RNA/DNA提取试剂盒方法对组织样品上清进行总核酸提取，肺脏组织样品用于猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因检测，腹股沟淋巴结组织样品用于猪圆环病毒2型Cap基因检测。

利用猪圆环病毒2型Cap基因引物（上游引物P₁：5′-GACTTGGTATATATACGTGGTAGGTA-3′；下游引物P₂：5′-CAGTTCTAGCAGACTCTACGTACGT-3′），按照扩增体系：10×PCR Buffer 2.5 μL，10 mol/L的上游引物0.5 μL，10 mol/L的下游引物0.5 μL，10 mmol/L的dNTP Mix 0.5 μL、Taq plus 0.3 μL，取待检DNA模板2 μL，补灭菌双蒸馏水至25 μL。PCR扩增程序：95 ℃预变性5 min，95 ℃变性40 s，51 ℃退火30 s，72 ℃延伸50 s，35个循环；72 ℃延伸10 min。上下游引物之间预期扩增片段长375 bp。

以总RNA为模板，采用1 st Strand cDNA试剂盒方法制备cDNA。利用猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因序列引物（上游引物P₃：5′-GCGAATAGGATGTTCTGCGAA-3′；下游引物P₄：5′-ACTATGCGTTAGGCTACAG-3′），按照反应体系（50 μL）：10×Ex Taq buffer 5 μL，dNTP Mix 4 μL，P₃引物2 μL，P₄引物2 μL，Ex taq 4 μL，ddH₂O 28 μL，cDNA 5 μL。PCR反应程序：96 ℃ 5 min，96 ℃ 30 s，55 ℃ 35 s，72 ℃ 55 s，37个循环；72 ℃延伸10 min。上、下游引物之间预期扩增片段长500 bp。

分别取PCR扩增产物各10 μL经1%琼脂糖凝胶电泳检测，在紫外凝胶成像仪下观察扩增结果。预期扩增出目的条带大小应为：猪圆环病毒2型Cap基因375 bp；猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因500 bp，阴性对照应无条带。

2 结果与分析

2.1 流行病学调查

2025年10月，某猪场从3个养殖户共计购买断奶仔猪216头，计划进行育肥。在混养的第8天仔猪出现明显发病症状，发病初期仔猪表现体温升高（40.0~41.5 ℃）、精神沉郁、食欲不振、被毛粗乱无光、呼吸困难、贫血、黄染、腹股沟淋巴结明显肿大；发病严重仔猪表现卧地不起、腹式呼吸、颤抖、耳尖和腹下呈蓝紫色，甚至死亡。截至混养后的第12天，共计死亡仔猪4头，明显发病仔猪32头。

剖检发病严重仔猪，病理变化主要为肺部表现间质性肺炎，肺脏有出血瘀血，肺尖叶、心叶呈暗红色，出现坏死和肉变；肠系膜淋巴结和腹股沟淋巴结出血、肿大；个别病死猪心包有积液，肾脏水肿和出血点，脾脏有肿大。调查还发现，从不同养殖户购买来的仔猪仅进行猪瘟活疫苗和猪口蹄疫灭活疫苗的免疫接种，仔猪购入后未及时进行药物保健和疫苗接种，并且该养猪场生物安全措施不完善。

2.2 实验室病原检测

分别取猪圆环病毒2型Cap基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明，扩增出目的条带大小为：猪圆环病毒2型Cap基因375 bp（图1），猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因500 bp（图2），与预期扩增片段大小相符，而阴性对照无扩增条带。

2.3 诊 断

通过对发病养猪场进行流行病学调查，临床发病症状和病理变化观察，结合实验室病原检测结果，综合分析确诊为猪繁殖与呼吸综合征与猪圆环病毒2型混合感染。

2.4 综合防控

1）加强饲养管理。目前，猪繁殖与呼吸综合征与猪圆环病毒2型疾病防控都没有特效治疗药物，对于发病严重和无治疗价值的仔猪，及时进行淘汰和无害化处理。发病猪群采取隔离措施，专人负责饲养管理，保持猪舍清洁、通风良好，降低猪群饲养密度，减少应激发生，创造舒适的生活环境；在饮水中添加复合电解多维，提高猪群整体抗病力；加强进出车辆、工作人员、使用工具及全场环境的消毒工作，消灭疾病传染源，切断传播途径，降低猪群感染PRRS、PCV2及继发感染其他病原的几率，防止疾病扩散和传播。

2）药物防治。仔猪混合感染猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型疾病，机体对外界环境的抵抗力下降，导致各种致病菌侵入，引起呼吸系统和消化系统的继发感染，造成严重的呼吸困难和腹泻等症状。因此，应及时科学使用药物进行预防和治疗。对于采食和饮水欲稍差的仔猪，按照每千克体重肌肉注射5 mg盐酸头孢噻呋注射液，1次/d，连用4 d。每升饮水中添加80 mg磷酸替米考星可溶性粉，全群饮水7 d。每千克饲料拌入200 mg黄芪多糖粉，自由采食7 d，用于增强抵抗力和非特异性免疫功能。

3）疫苗接种。在药物预防和治疗3 d后，猪群整体精神和发病症状有一定好转。紧急进行疫苗联合免疫接种，一侧颈部肌肉注射猪繁殖与呼吸综合征活疫苗1头份/头，另一侧颈部肌肉注射猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗和猪圆环病毒2型灭活疫苗预先混合均匀的联合疫苗2 mL/头。通过紧急接种猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型疫苗使猪群快速获得免疫保护，尽快遏制疾病的进一步发生和流行，避免发病猪场造成更大的损失和危害，但是疫苗免疫也是一把“双刃剑”，对于发病仔猪可能会造成发病加重，甚至死亡。在疫苗免疫后第21天，再次注射预先混合均匀的猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗和猪圆环病毒2型灭活疫苗进行加强免疫2 mL/头，确保猪群产生坚强而持久的免疫保护作用。

3 讨 论

猪圆环病毒2型是一种重要的猪免疫抑制性疫病，为其他病原感染提供了条件，导致病程长、症状复杂^[9]，PRRSV感染导致免疫功能下降^[10]，因此PRRSV感染增加PCV2感染的风险；反之，PCV2感染加重PRRS的病理损伤。猪繁殖与呼吸综合征与猪圆环病毒2型混合感染，二者共同作用导致严重的猪群临床发病。

本次猪群发病，通过采取流行病学调查、临床发病症状和病理变化观察、实验室病原检测等措施，及时确诊为猪繁殖与呼吸综合征与猪圆环病毒2型混合感染。猪场采取加强饲养管理、提高机体抗病力和创造舒适环境，使用药物防治继发感染，并且紧急采取联合免疫疫苗的综合防控措施。在猪场采取综合防控措施的第15天，猪群的发病状况得到有效控制。因此，建立完善的猪场生物安全体系，注重药物防治和使用疫苗预防疾病，应用科学饲养管理措施，才能确保养猪业的健康发展。

由于猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型疾病在短期内净化难度较大，猪场在日常疾病防控过程中必须引起足够重视，目前防控的主要手段是加强生物安全管理和科学接种疫苗。断奶仔猪最易发生猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型混合感染，并且发病症状比较严重。疫苗免疫是病毒性疾病防控的基础^[11]，首先要加强妊娠母猪疫苗免疫接种，使仔猪通过吃母乳获得高水平的母源抗体保护，然后在仔猪断奶前进行猪繁殖与呼吸综合征疫苗和猪圆环病毒2型疫苗的接种，保护仔猪安全度过保育期。因此，制定科学、合理、适宜本猪场的免疫程序，对于预防疾病发生具有重要意义。目前，市场上已有猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型的多种类型、多个厂家供应的疫苗，应选择抗原定量添加的高纯度、高浓度、对多个流行毒株具有交叉免疫保护的高品质疫苗，对于猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型的防控显得尤为重要。

参考文献

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