高产磷脂酶D的蜡样芽孢杆菌诱变筛选及发酵条件优化

王天一; 刘欢; 王芳; 邓利

doi:10.13543/j.bhxbzr.2023.05.008

北京化工大学学报（自然科学版） ›› 2023, Vol. 50 ›› Issue (05) : 71 -79. DOI: 10.13543/j.bhxbzr.2023.05.008

高产磷脂酶D的蜡样芽孢杆菌诱变筛选及发酵条件优化

王天一, 刘欢, 王芳, 邓利

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摘要

蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)是一种天然的磷脂酶D(PLD)生产菌株，为了提高PLD产量，以野生型蜡样芽孢杆菌(B.cereus CICC 20551)为出发菌，使用紫外线和硫酸二乙酯对其进行复合诱变，通过建立的PLD活性高效筛选方法，从大量突变样本中筛选得到一株高产PLD的蜡样芽孢杆菌S6-UD46。将该菌株摇瓶发酵48 h,产酶量达到0.52 U/mL,相比原始菌株(0.32 U/mL)提高了62.5%。对诱导产酶条件与培养基成分进行了优化，确定最佳发酵条件为：以20 g/L牛肉膏为氮源，10 g/L蔗糖为碳源，在600 nm波长下的光密度(OD_(600))达到4左右时加入40 g/L卵磷脂(磷脂酰胆碱含量>90%)对突变菌株S6-UD46进行诱导产酶，在37℃、200 r/min下培养48 h, PLD酶活性可达3.22 U/mL,是优化前的6.19倍。