髓鞘调控因子的镍金属螯合纯化及影响因素研究

摘要

为研究髓鞘调控因子（myelin-gene regulatory factor, MYRF）的镍金属螯合层析纯化方法及其影响因素，以导入MYRF基因的BL21大肠埃希菌为宿主菌，设置不同浓度梯度的咪唑和EDTA洗脱进行镍金属螯合层析柱纯化，通过蛋白质浓度测定、考马斯亮蓝染色和SDS-PAGE分析等方法分析差异，进一步研究蛋白质上清液与镍填料结合时间对MYRF蛋白纯化的影响。结果表明：咪唑洗脱获得的蛋白质浓度与洗脱液浓度呈正比，0.2 mol·L^-1的咪唑洗脱液可获得纯度较高的MYRF蛋白；而低浓度(0.05 mol·L^-1) EDTA洗脱液虽可快速获得高浓度MYRF蛋白，但杂蛋白含量也较高；同时，MYRF蛋白浓度与结合时间呈正相关。综上，MYRF蛋白镍金属螯合层析受洗脱液种类、填料结合时间等多种因素影响，研究结果为MYRF蛋白纯化策略的选择和优化提供参考依据。

关键词

镍柱 / 咪唑 / EDTA / 蛋白质纯化 / 结合时间