空肠弯曲菌双分子荧光互补系统构建及其在蛋白质互作研究中的应用

郭嘉乐; 任方哲; 李晓飞; 郭长彬; 焦新安; 黄金林

doi:10.16872/j.cnki.1671-4652.2024.04.001

扬州大学学报（农业与生命科学版） ›› 2024, Vol. 45 ›› Issue (04) : 1 -10. DOI: 10.16872/j.cnki.1671-4652.2024.04.001

空肠弯曲菌双分子荧光互补系统构建及其在蛋白质互作研究中的应用

郭嘉乐, 任方哲, 李晓飞, 郭长彬, 焦新安, 黄金林

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摘要

为研究空肠弯曲菌中蛋白质的相互作用，建立适合于该菌稳定高效表达的双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation, BiFC)系统，通过构建基于基因启动子、荧光蛋白以及基因回补方式等不同条件的重组载体，分别导入空肠弯曲菌进行荧光数值比较分析，确定荧光表达最优的参数，建立以porA启动子和Venus荧光蛋白的质粒回补的BiFC体系。用该体系探究空肠弯曲菌鞭毛表达蛋白的互作。结果表明：已知flhF与flhG互作的BiFC-flhF-flhG载体在菌体内表达的荧光值显著高于阴性对照载体，而BiFC-flhF-fliM和BiFC-flhF-fliG与阴性对照无差异，说明BiFC体系建立成功，且flhF与fliG、fliM不存在互作关系。综上，本研究建立了适用于空肠弯曲菌的BiFC体系，可为该菌蛋白质互作研究提供高效便捷的方法。