凤仙花坏死斑病毒NP基因原核表达及抗血清制备

摘要

凤仙花坏死斑病毒（impatiens necrotic spot virus,INSV）可引起多种农业和园艺观赏作物的严重病害,该病害在世界范围内普遍发生,建立快速有效的检测方法对INSV的防控有着重要意义。以INSV Nuclear Protein基因序列引物进行扩增,获得789 bp的目的基因,将其与原核表达载体pET28a连接,获得重组质粒pET28a-NP^INSV,将其转化大肠埃希菌Rosetta菌株。经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳检测显示在分子量约28.7 ku处有目的蛋白质条带,与预期的INSV NP大小一致。利用镍柱亲和纯化INSV NP蛋白,并免疫健康新西兰大白兔,制备兔多克隆抗血清。通过Dot blot和ELISA方法对INSV NP多克隆抗血清进行检测,结果显示其能特异性识别INSV的NP蛋白。应用此抗血清在受INSV侵染的桃叶样品中能检测到NP蛋白的表达,而在健康植株叶片中未检测到。对制备的抗血清用纯水稀释至1:20 000时,仍能特异地检测到目的蛋白质条带,说明该抗血清特异性较强,效价较高,可为INSV的快速检测提供有效的方法参考。

关键词

凤仙花坏死斑病毒 / NP蛋白 / 原核表达 / 抗血清