鼠抗人ANKRD13C单克隆抗体的制备与鉴定

摘要

为制备针对锚蛋白重复结构域蛋白13C （ankyrin repeat domain-containing protein 13C,ANKRD13C）的单克隆抗体,利用PCR扩增人源ANKRD13C基因,并与原核表达载体pET-32a（+）和pGEX-6P-1连接构建重组质粒,通过诱导表达纯化ANKRD13C重组蛋白、免疫小鼠、PEG法融合细胞和单克隆化,获得9株分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,包括7株IgG1类抗体和2株IgM类抗体。经免疫印迹法鉴定,其中1株IgG1类抗体8E3能特异性识别细胞内源性表达的ANKRD13C,将该杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔内生产腹水,纯化后经ELISA检测其效价为1:2.51×10～5,亲和常数达（9.78±0.55）×10～9 L·mol^-1。这一研究表明,该抗体可应用于ELISA、Western blot和IFA等试验,为深入研究ANKRD13C生物学功能奠定基础。

关键词

ANKRD13C / 单克隆抗体 / 杂交瘤细胞 / 半固体培养基